[发明专利]一种使用家蚕制备镇痛多肽的方法

权利要求书

1.一种使用家蚕制备镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，具体操作包含以下步骤：

（1）根据BmNPV密码子使用频率优化芋螺毒素ω-MVIIA基因序列，经密码子优化的ω-MVIIA基因的序列为SEQ ID NO.1，其编码的ω-MVIIA前体蛋白序列为SEQ ID NO.2；

（2）导入EGFP基因，构建重组供体质粒pFBD-MVIIA/EGFP；

（3）筛选含有ω-MVIIA基因的重组BmNPV病毒vBm^MVIIA/EGFP，即重组芋螺毒素ω-MVIIA。

2.根据权利要求1所述的一种使用家蚕制备镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述构建重组供体质粒pFBD-MVIIA/EGFP具体方法为：首先合成优化后的ω-MVIIA基因，经BamHI/HindIII双酶切后，连入经同样酶切的供体质粒pFastBacDual，并连入EGFP基因，得到重组供体质粒pFBD-MVIIA/EGFP。

3.根据权利要求1所述的一种使用家蚕制备镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述筛选含有ω-MVIIA基因的重组BmNPV病毒vBm^MVIIA/EGFP的具体方法为：采用Bac-to-Bac法，将重组供体质粒pFBD-MVIIA/EGFP上的ω-MVIIA基因和EGFP基因转座到BmNPV，通过蓝白斑筛选，获得含有重组BmNPV的白色大肠杆菌菌落，从大肠杆菌中提取BmNPV基因组DNA，并进行PCR鉴定，筛选出含有ω-MVIIA基因的重组BmNPV，将其命名为vBm^MVIIA/EGFP。

4.一种根据权利要求1所述方法获得的重组芋螺毒素ω-MVIIA，所述重组芋螺毒素ω-MVIIA具有镇痛活性。

5.根据权利要求4所述的重组芋螺毒素ω-MVIIA在制备镇痛药物中的应用。