[发明专利]转基因水稻PA110-15品系特异性5’端定量PCR检测引物

权利要求书

1.一种转基因水稻PA110-15品系特异性5’端定量PCR检测引物，其特征在于，包括品系特异性引物，

所述特异性引物为：PA110-5-qF，其核苷酸序列如序列表SEQIDNo.1所示；PA110-5-qR，其核苷酸序列如序列表SEQIDNo.2所示。

2.根据权利要求1所述的转基因水稻PA110-15品系特异性5’端定量PCR检测引物，与其匹配的探针为：PA110-5-P,探针序列如序列表SEQIDNo.3所示。

3.一种转基因水稻PA110-15品系特异性的定量检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)提取待检测水稻样品的DNA；

(2)以提取的水稻样品的DNA为模板，设定水稻内源基因实时荧光PCR反应体系和PA110-15水稻品系特异性实时荧光PCR反应体系，将上述体系放入96孔PCR板；

(3)将96孔PCR板放在水平低速离心机中，2000rpm离心30s，然后放入PCR仪中；

(4)运行实时荧光PCR反应，若特异性实时荧光PCR反应体系没有扩增信号出现，则证明样品中不含有转基因PA110-15水稻品系；

(5)若特异性实时荧光PCR反应体系扩增出目的荧光信号，则证明样品中含有转基因PA110-15水稻品系，根据标准梯度样品读取的特异性实时荧光PCR反应的Ct值和水稻内源基因实时荧光PCR反应的Ct值,以Ct值为Y轴，基因组DNA拷贝数的对数为X轴，绘制标准曲线,标准曲线方程为Ct＝k×Lg(Copies)+b,分别得到一条内源标准曲线方程和一条外源标准曲线方程，再将待测样品中Ct值带入方程即得到了外源基因和内标准基因的拷贝数，然后按下述公式计算转基因含量:样品中转基因PA110-15水稻品系的含量％＝外源基因拷贝数/内标准基因拷贝数。

4.根据权利要求3所述的转基因水稻PA110-15品系特异性的定量检测方法，其特征在于，所述PA110-15水稻品系特异性实时荧光PCR反应体系为：无菌水8μL，2×TaqMan反应缓冲液12.5μL，10μmol/LPA110-5-qF1μL，10μmol/LPA110-5-qR1μL，10μmol/LPA110-5-P0.5μL，DNA模板2.0μL。

5.根据权利要求3所述的转基因水稻PA110-15品系特异性的定量检测方法，其特征在于，所述实时荧光PCR反应的条件为：95℃，5min；95℃，15s,60℃，60s，45个循环。