[发明专利]转基因水稻PA110-15外源基因纯合杂合状态的PCR检测引物有效
| 申请号： | 201510685232.X | 申请日： | 2015-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN105132582A | 公开（公告）日： | 2015-12-09 |
| 发明（设计）人： | 李亮;金芜军;安娜;马晓娇;宛煜嵩;柳方方;董美;苗朝华;黄卫红 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 11279 | 代理人： | 司丽春;胡耀成 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 水稻 pa110 15 基因 纯合杂合 状态 pcr 检测 引物 | ||
1.一种转基因水稻PA110-15外源基因纯合杂合状态的PCR检测引物，其特征在于，所述引物为：PA110-LA-F，其核苷酸序列如序列表SEQIDNo.1所示；PA110-LA-R，其核苷酸序列如序列表SEQIDNo.2所示。
2.一种转基因水稻PA110-15外源基因纯合杂合状态的PCR检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
(1)提取待检测水稻样品的DNA；
(2)以提取的DNA为模板，以SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核苷酸序列为扩增引物，建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；
(3)如果仅扩增出一条3856bp片段，则待检测的样品为纯合转基因水稻PA110-15；如果扩增出3856bp和751bp的两条片段，待检测的样品为杂合转基因水稻PA110-15；如果只扩增出一条751bp片段，待检测的样品为非转基因水稻。
3.根据权利要求2所述的转基因水稻PA110-15外源基因纯合杂合状态的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR扩增体系按照以下方式建立：反应体系的总体积为25.0μL，其中，10×LATaqBufferII(Mg2+Plus)缓冲液2.5μL，5U/μL的TaKaRaLATaq聚合酶0.25μL，dNTPMixture(2.5mMeach)4.0μL，10μmol/LSEQIDNo.1所示的引物1μL，10μmol/LSEQIDNo.2所示的引物1μL，25ng/μLDNA模板2μL，余量为双蒸水。
4.根据权利要求2述的转基因水稻PA110-15外源基因纯合杂合状态的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件为：94℃变性1min；98℃，10s，66℃，5min，30个循环；72℃延伸10min。
5.一种转基因水稻PA110-15外源基因纯合杂合状态的PCR检测试剂盒，其特征在于，包括：10×LATaqBufferII缓冲液，TaKaRaLATaq聚合酶，dNTPMixture，引物和双蒸水；所述引物的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的序列。
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