[发明专利]同时检测多种辣椒病毒的四重RT-PCR检测引物及方法

权利要求书

1.一种同时检测多种辣椒病毒的四重RT-PCR检测引物，该辣椒病毒为：蚕豆萎蔫病毒2号、辣椒叶脉黄化病毒、辣椒叶脉斑驳病毒及辣椒轻斑驳病毒，其特征在于，所述引物包括如下4对引物：

检测蚕豆萎蔫病毒2号的引物对为：

BBWV2-F：CTCCTGTGGTGGTTATTCA，

BBWV2-R：TTCCTATGCGTGTTATCGT；

检测辣椒叶脉黄化病毒的引物对为：

PevYV-F：GAAGAAGCCGAGATAGAGTT，

PevYV-R：ATAGAGCAGCCTGAATTGAT；

检测辣椒叶脉斑驳病毒的引物对为：

ChiVMV-F：AACCTTGAACACCTTCTTGA，

ChiVMV-R：GTCCAGTCCGAACATCCT；

检测辣椒轻斑驳病毒的引物对为：

PMMoV-F：GTCCAACAGCAGTTCTCT，

PMMoV-R：CTAATAGCCACCGTAGCAT。

2.一种同时检测多种辣椒病毒的四重RT-PCR检测方法，其特征在于，该方法是提取辣椒总RNA；以得到的RNA为模板，通过反转录，得到cDNA；以得到的cDNA为模板，用权利要求1所述的4对引物对其进行PCR扩增，最后电泳鉴定。

3.如权利要求2所述的同时检测多种辣椒病毒的四重RT-PCR检测方法，其特征在于：所述PCR反应体系为：10xPCRBUFFER5μl、dNTPs5μl、PCRTaq2μl、cDNA模板2.5μl、蚕豆萎蔫病毒2号正向引物和反向引物各0.5μl、辣椒叶脉黄化病毒正向引物和反向引物各1.25μl、辣椒叶脉斑驳病毒正向引物和反向引物各1μl、辣椒轻斑驳病毒正向引物和反向引物各1.25μl、超纯水补至50μl。

4.如权利要求2所述的同时检测多种辣椒病毒的四重RT-PCR检测方法，其特征在于：所述PCR反应程序为：92℃10min；94℃30s，54-58℃30s，72℃1min，40个循环；72℃10min。

5.含有权利要求1所述引物对的同时检测多种辣椒病毒的四重RT-PCR检测试剂盒。