[发明专利]用于牛肉中猪肉成分定量检测的组合物、试剂盒和方法在审
| 申请号： | 201510689229.5 | 申请日： | 2015-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN105274224A | 公开（公告）日： | 2016-01-27 |
| 发明（设计）人： | 吴亚君;陈磊;陈颖 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京律智知识产权代理有限公司 11438 | 代理人： | 于宝庆;刘春生 |
| 地址： | 100123 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 牛肉 猪肉 成分 定量 检测 组合 试剂盒 方法 | ||
1.通过padlock-RCA-microscopy等温数字化检测方法检测牛肉中猪肉成分的组合物，所述组合物包含牛padlock探针序列SEQIDNo.1、猪padlock探针序列SEQIDNo.2、捕获探针序列SEQIDNo.3、牛检测探针序列SEQIDNo.4和猪检测探针序列SEQIDNo.5，其中在捕获探针序列5’端连接有生物素，在检测探针5’端连接有荧光素。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中在牛检测探针的5’端连接FITC，在猪检测探针的5’端连接cy3。
3.用于基于padlock-RCA-microscopy等温数字化检测方法鉴别牛肉中猪肉成分的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的组合物。
4.检测牛肉中猪肉成分的padlock-RCA-microscopy等温数字化检测方法，所述方法包括使用权利要求1或2所述的组合物或权利要求3所述的试剂盒。
5.根据权利要求4所述的方法，包括步骤：
1)获得来自待测牛肉产品的总DNA样品；
2)使用牛padlock探针序列SEQIDNo.1和猪padlock探针序列SEQIDNo.2进行连接反应，获得环状DNA序列；
3)使用捕获探针SEQIDNo.3进行捕获反应，将环状DNA序列捕获在固相；
4)使用牛检测探针序列SEQIDNo.4和猪检测探针序列SEQIDNo.5在所述固相上进行滚环复制反应，从而扩增所捕获的序列；
5)通过荧光显微镜检测扩增序列。
6.权利要求5所述的方法，其中包括对所述总DNA样品进行酶切。
7.权利要求6所述的方法，其中所述酶切过程使用HaeIII酶。
8.权利要求5所述的方法，其中包括使用图像分析软件对扩增序列进行定量。
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