[发明专利]CIK三维环境下的制备方法

权利要求书

1.一种CIK三维环境下的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，

取抑肽酶溶解纤维蛋白原，获得溶液A；

配制含有凝血酶的溶液B；

获取单个核细胞，并将所述单个核细胞与溶液A和溶液B三者混合，获得预诱导混合物；

再对所述预诱导混合物中的单个核细胞进行诱导培养，生成CIK。

2.根据权利要求1所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于,所述单个核细胞的浓度为1*10²-10⁶个/ml，所述抑肽酶的浓度为1000-3000KIU/ml；所述溶液A中，纤维蛋白原的浓度为1.5～3.5g/L；所述溶液B中凝血酶的浓度为250-400U/ml。

3.根据权利要求2所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于,所述单个核细胞的浓度为1*10⁴个/ml，所述抑肽酶的浓度为2000KIU/ml；所述溶液A中，纤维蛋白原的浓度为2.0g/L；所述溶液B中凝血酶的浓度为300U/ml。

4.根据权利要求2所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于,所述单个核细胞的浓度为1*10²个/ml，所述抑肽酶的浓度为1000KIU/ml；所述溶液A中，纤维蛋白原的浓度为1.5g/L；所述溶液B中凝血酶的浓度为250U/ml。

5.根据权利要求2所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于,所述单个核细胞的浓度为1*10⁶个/ml，所述抑肽酶的浓度为3000KIU/ml；所述溶液A中，纤维蛋白原的浓度为3.5g/L；所述溶液B中凝血酶的浓度为400U/ml。

6.根据权利要求1所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于,所述溶液B由凝血酶和可溶性钙盐溶液共同配制而成。

7.根据权利要求6所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于,所述可溶性钙盐为CaCl₂，且CaCl₂溶液的浓度为30-50mmol/L。

8.根据权利要求1所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于，单个核细胞与溶液A和溶液B混合后置于10-40℃至凝固。

9.根据权利要求1-8任一项所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于，对所述预诱导混合物中的单个核细胞的诱导培养过程为：

将预诱导混合物置于含有抗CD3单克隆抗体和RetroNectin预包被的培养器皿中，并加入含PPP和IFN-γ的培养基进行培养；

再添加生长因子IL-1α和IL-2继续培养至单个核细胞转化成CIK。

10.根据权利要求9所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于，所述抗CD3单克隆抗体的浓度为10-150ng/ml，所述RetroNectin的浓度为10-50g/ml。

11.根据权利要求9所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于，所述培养基中PPP的体积分数为0.5-2％，IFN-γ的浓度为500-1500IU/ml。

12.根据权利要求9所述的CIK三维环境下的制备方法，其特征在于，所述IL-1α在培养基中的浓度为50-150IU/ml，IL-2在培养基中的浓度为100-500IU/ml。