[发明专利]一种gp96蛋白和PD1抗体的偶联物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种具有免疫治疗疾病功能的试剂盒，包括

由gp96蛋白与PD1抗体偶联得到的gp96-PD1抗体偶联物；

所述gp96蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示；

所述免疫治疗疾病为如下（1）或（2）：

（1）作为活性成分而免疫治疗肿瘤；所述肿瘤为肝癌、乳腺癌和/或黑色素瘤；

（2）作为疫苗佐剂制备疫苗、进而免疫治疗病毒感染引起的疾病；所述病毒为乙型肝炎病毒。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

所述免疫治疗疾病为如下（a）-（d）中至少一种：

（a）激活和增强机体T细胞对病原的免疫应答反应；

（b）使病原特异性T细胞数量增多；

（c）促进T细胞杀伤带有病原的细胞；

（d）抑制病原增殖或生长；

所述病原为肿瘤或病毒；

所述病毒为乙型肝炎病毒；

所述肿瘤为肝癌、乳腺癌和/或黑色素瘤。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

所述偶联物中，所述gp96蛋白和所述PD1抗体的偶联比为1:1。

4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：

所述gp96蛋白为利用昆虫细胞表达系统获得的gp96蛋白或来源于离体的肿瘤组织或肿瘤细胞的gp96蛋白；

所述肿瘤细胞具体为黑色素瘤细胞或乳腺癌细胞或肝癌细胞；

所述肿瘤组织具体为黑色素瘤组织或乳腺癌组织或肝癌组织。

5.根据权利要求4述的试剂盒，其特征在于：所述黑色素瘤细胞为黑色素瘤细胞系B16；

所述乳腺癌细胞具体为乳腺癌细胞系4T1；

所述肝癌细胞具体为肝癌细胞系H22。

6.一种制备权利要求1-5中任一项所述试剂盒中gp96-PD1抗体偶联物的制备方法，包括如下步骤：

1）分别制备醛化gp96蛋白溶液和PD1抗体溶液；

所述醛化gp96蛋白溶液为将gp96蛋白与戊二醛溶液反应，得到醛化的gp96蛋白溶液；

所述PD1抗体溶液为将PD1抗体溶于NaCl水溶液，得到PD1抗体溶液；

2）将所述醛化gp96蛋白溶液和所述PD1抗体溶液在缓冲体系中反应，得到gp96-PD1抗体偶联物；

所述gp96蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述醛化的gp96蛋白溶液中gp96蛋白的浓度为10 mg/mL；

所述PD1抗体溶液中PD1抗体的浓度为5 mg/mL；

所述醛化gp96蛋白溶液和所述PD1抗体溶液的体积比为0.4：1；

所述步骤1）的反应条件为25℃条件下反应18h；

所述步骤2）的反应条件为4℃透析过夜；

所述缓冲体系的pH值为9.6。

8.权利要求6或7所述的方法制备得到的gp96-PD1抗体偶联物。

9.权利要求1-5中任一所述的试剂盒或权利要求8所述的gp96-PD1抗体偶联物在制备具有免疫治疗疾病功能的产品中的应用：

所述免疫治疗疾病为如下（1）或（2）：

（1）作为活性成分而免疫治疗肿瘤；所述肿瘤为肝癌、乳腺癌和/或黑色素瘤；

（2）作为疫苗佐剂制备疫苗、进而免疫治疗病毒感染引起的疾病；所述病毒为乙型肝炎病毒。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述免疫治疗疾病为如下（a）-（d）中至少一种：

（a）激活和增强机体T细胞对病原的免疫应答反应；

（b）使病原特异性T细胞数量增多；

（c）促进T细胞杀伤带有病原的细胞；

（d）抑制病原增殖或生长；

所述病原为肿瘤或病毒；

所述病毒为乙型肝炎病毒；

所述肿瘤为肝癌、乳腺癌和/或黑色素瘤。