[发明专利]一种治疗股骨头坏死药物的检测方法

权利要求书

1.一种治疗股骨头坏死药物的检测方法，所述的治疗股骨头坏死药物是由以下原料药制备而成的药物：三七、淫羊藿、丹参、骨碎补、红花、牛膝、续断、延胡索，所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；

其中，所述鉴别方法包括如下鉴别：

（1）三七、续断的薄层鉴别：取所述药物6g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次50ml，弃去乙醚液，水层再用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次每次50ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次50ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另分别取三七、续断对照药材各0.5g，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R₁对照品、人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Rb₁对照品、川续断皂苷Ⅵ对照品加甲醇分别制成每1ml分别含1mg、2.5mg、2.5mg、1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液3μl、对照品溶液各5μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-丁酮-水=2:2:1:4的上层溶液为展开剂，展开，展距15cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；

（2）淫羊藿的薄层鉴别：取所述药物2g，研细，乙酸乙酯回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使其溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液；再取淫羊藿苷对照品1mg，加甲醇溶解，制成0.5mg/ml对照品溶液；取淫羊藿阴性样品1.2g，再按供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液，阴性溶液，对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水=12:7:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝溶液，在105℃加热2min，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性无此斑点；

（3）丹参中丹酚酸B的薄层鉴别：取本品1g，加水50ml，加盐酸0.1ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl点于同一硅胶G薄层版上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=2:3:4:0.5:2为展开剂，展开，展距15cm，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）骨碎补的薄层鉴别：取本品2g，加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使其溶解，作为供试品溶液；另取骨碎补对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；另取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液和对照品溶液各2μL，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水=1:12:2.5:3取上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇试液，在105℃加热约5分钟，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（5）延胡索的薄层鉴别：取本品5g，加浓氨试液3ml，加乙醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-甲醇=15:8:2为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

所述含量测定方法包括淫羊藿苷、丹酚酸B含量的测定方法：

以下所述为淫羊藿苷的含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱为phenomenexLunaC₁₈250mm×4.6mm，5μm，流动相为乙腈－水=25:75，波长为270nm，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，进样量为对照品溶液5μl和供试品溶液10μl，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000；

（2）对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液；

（3）供试品溶液的制备：取本品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）淫羊藿苷含量测定：分别精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以外标一点法计算样品中淫羊藿苷的含量；

以下所述为丹参中丹酚酸B的含量测定：

（1）色谱条件：色谱柱KromasilC₁₈250mm×4.6mm，5μm，流动相为甲醇-乙腈-1.7%甲酸水=20:11:69，流速为1.0ml/min，检测波长286nm，进样量为对照品溶液、供试品溶液各进10μl，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000；

（2）对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本品研细，取0.4g，精密称定，置50ml量瓶中，加75%甲醇约45ml，超声处理功率200W，频率40kHz，30分钟，放冷，加75%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）丹酚酸B含量的测定：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，以外标一点法计算样品中丹酚酸B的含量。