[发明专利]复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆及制备方法和应用

权利要求书

1.复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆，其序列为SEQ ID NO:31。

2.权利要求1所述亚克隆的制备方法，包括：

1)构建Ubc启动子驱动的西门利克森林病毒复制子：

使用PvuI和EcoRV酶切pSFV-replicon，然后采用Vazyme同源重组试剂盒将SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:7片段插入到pSFV-replicon，将重组产物转化感受态HB101，PCR鉴定为阳性的克隆进行培养并抽提质粒进行测序，测序正确的克隆命名为Ubc-SFV-replicon；

2)构建携带EGFP基因的西门利克森林病毒复制子：

使用BamHI和XhoI酶切Ubc-SFV-replicon，然后采用Vazyme同源重组试剂盒将SEQ IDNO:10片段插入到以SFV复制子质粒Ubc-SFV-replicon，将重组产物转化感受态HB101，PCR鉴定为阳性的克隆进行培养并抽提质粒进行测序，测序正确的克隆命名为Ubc-SFV-replicon-EGFP；

3)构建高效表达EGFP的西门利克森林病毒复制子

使用ApaI和NruI酶切Ubc-SFV-replicon-EGFP，然后采用Vazyme同源重组试剂盒将SEQID NO:13和SEQ ID NO:18片段插入到Ubc-SFV-replicon-EGFP，将重组产物转化感受态HB101，PCR鉴定为阳性的克隆进行培养并抽提质粒进行测序，测序正确的克隆命名为Ubc-SFV-replicon-EGFP-hdvr-BGHpA；

4)制备缺失病毒衣壳蛋白基因且携带EGFP基因的西门利克森林病毒的亚克隆

使用ApaI和NruI酶切Ubc-SFV-replicon-EGFP-hdvr-BGHpA，然后采用Vazyme同源重组试剂盒将片段SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:28插入到Ubc-SFV-replicon-EGFP-hdvr-BGHpA，将重组产物转化感受态HB101，PCR鉴定为阳性的克隆进行培养并抽提质粒进行测序，测序正确的克隆命名为Ubc-SFV-FL-EGFP-△C，其序列为SEQID NO:31所示。

3.权利要求1所述的的亚克隆在制备复制耐受型西门利克森林病毒病毒样颗粒中的应用。

4.利用权利要求1所述的亚克隆制备的复制耐受型西门利克森林病毒病毒样颗粒。

5.权利要求4所述的病毒样颗粒的应用；

所述的应用为制备神经细胞精细形态的描绘的制剂、制备神经环路的解析的制剂、制备神经环路稀疏标记的制剂、制备病毒抗原表位分析的制剂、病毒抗体药物筛选、制备疫苗、制备诊断试剂、动物模型的建立或病毒复制中的应用。

6.权利要求4所述的病毒样颗粒的应用；所述的应用为在制备基因治疗药物或是制备致病机制研究药物中的应用。