[发明专利]复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆及制备方法和应用

说明书

本发明公开了复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆及制备方法和应用，其亚克隆的序列为SEQ ID NO.31所示。复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆的制备方法包括（1）制备依赖启动子但无需体外转录的高效复制子系统，（2）制备缺失病毒衣壳蛋白基因的亚克隆。利用该亚克隆制备出的复制耐受型的病毒样颗粒，可用于蛋白表达、基因治疗、神经细胞精细形态的描绘、神经环路的解析、神经环路稀疏标记、病毒抗原表位分析、病毒抗体药物筛选、疫苗、诊断试剂、动物模型的建立或病毒复制与致病机制研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体涉及复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆及制备方法和应用。

背景技术

西门利克森林病毒(Semliki forest virus，SFV)属于披膜病毒科甲病毒属，其基因组为单股正链RNA，长度约为12kb。基因组编码的多聚蛋白可切割成5个结构蛋白(C、E3、E2、6K和E1)和4个非结构蛋白(nsP1、nsP2、nsP3和nsP4)。非结构蛋白参与病毒的复制和包装等过程，而结构蛋白参与病毒粒子的组装。西门利克森林病毒具有广泛的宿主范围，且能够感染神经系统。病毒作为一种微生物，一方面对人类的健康和农业生产产生不利的影响，另一方面，病毒的感染特性使得其具有为人类所利用的能力，从而为人类的健康和农业生产服务。因此，必须充分了解病毒的生物学特性，才能够有得放矢去改造病毒。

随着分子生物学的不断发展，科学家已经能够通过反向遗传学的手段来定向改造病毒，为深入开展相关的病毒学研究提供了良好的工具。因此，本发明分别采用不同的技术途径获得了一种具有复制耐受型的西门利克森林病毒样颗粒。将在蛋白表达、基因治疗、疫苗和诊断试剂的研发、神经细胞和非神经细胞精细形态的描绘、灵长类和非灵长类解析脑神经环路、病毒抗原表位分析和药物(如抗体药物)筛选、动物模型的建立和病毒复制与致病机制的分析等方面具有广泛的应用价值和前景。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆，其序列为SEQ ID NO.31所示，该亚克隆可用于西门利克森林病毒病毒样颗粒的制备。

本发明的另一个目的在于提供了一种复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆的制备方法，方法简单。

本发明还有一个目的在乎提供了复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆在制备复制耐受型西门利克森林病毒病毒样颗粒中的应用，制备出的病毒样颗粒在蛋白表达、基因治疗、神经细胞精细形态的描绘、神经环路的解析、神经环路稀疏标记、病毒抗原表位分析和药物(如抗体药物)筛选、疫苗和诊断试剂的研发、动物模型的建立和病毒复制与致病机制的分析等方面具有广泛的应用价值。

为了实现以上目的，本发明采用如下技术方案：

复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆，其序列为SEQ ID NO.31所示。

复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆的制备方法，包括：(1)制备依赖启动子的而无需体外转录的高效复制子系统，(2)制备缺失病毒衣壳蛋白基因的亚克隆。

SEQ ID NO.31所示的复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆，包括以下步骤：

1.构建Ubc启动子驱动的的西门利克森林病毒复制子：

使用PvuI和EcoRV酶切pSFV-replicon(Berglund,P et al.,(1993)Biotechnology11,916-920.)，然后采用Vazyme同源重组试剂盒将SEQ ID NO:1，SEQ IDNO:4和SEQ ID NO:7片段插入到pSFV-replicon，将重组产物转化感受态HB101，PCR鉴定为阳性的克隆进行培养并抽提质粒进行测序，测序正确的克隆命名为Ubc-SFV-replicon。

2.构建携带EGFP基因的西门利克森林病毒复制子：