[发明专利]一种肠球菌Y12及其用途

权利要求书

1.一种肠球菌（Enterococcussp.）Y12，其特征在于：其保藏号为CCTCCNo：M2015474。

2.根据权利要求1所述的肠球菌Y12，其特征在于，其保藏方法为：将菌株接入含3%NaCl的LB培养基，在28℃，180rpm下培养24h，得发酵液；取1.5mL离心管，按1:1的比例将发酵液与灭过菌的30%甘油混合装入其中，颠倒数次混匀后放入-40℃冰箱保存。

3.根据权利要求1所述的肠球菌Y12，其特征在于，其分离筛选方法如下：

（1）富集：采集虾蟹贝混养池底泥5g，转入装有100mL已灭菌的氨氧化细菌富集培养基500mL三角瓶，再加入十多粒玻璃珠，在28℃，180rpm培养3d后，用移液器吸取5mL移入含有100mL新鲜富集培养基的500mL三角瓶中，再富集3d；依次类推，共富集三次；得富集液；氨氧化细菌富集培养基的配方是：胰蛋白胨5.0g，MgS0₄·7H₂O0.5g，FeS0₄·7H₂00.1g，KCl0.3g，陈海水1000mL，pH7.2；

（2）分离纯化：取1mL上述富集液转入装有9mL无菌水的试管中，混匀，按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-66个梯度稀释；分别吸取0.1mL涂布于氨氧化细菌分离培养基上并标记；分离培养基是在富集培养基基础上多加其质量的2%的琼脂；将已涂布的平板于28℃下培养48h；待菌落可用肉眼明显辨别时，借助放大镜仔细挑选出颜色、形态等特征有差异的单菌落，然后进行三区划线，于28℃下培养48h；重复三区划线分离单菌落直至得到纯培养物13个菌株，分别编号为Y1，Y2，Y3，Y4，Y5，Y6，Y7，Y8，Y9，Y10，Y11，Y12，Y13；

（3）筛选：氨氧化细菌筛选培养基：葡萄糖5.0g，(NH₄)₂SO₄0.25g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.25g，陈海水1000mL，pH7.2；

参照GB17378.4-2007次溴酸盐氧化法测定氨氮含量；制备100mg/L(NH₄)₂SO₄标准贮备溶液，稀释测定各标准(NH₄)₂SO₄浓度下的A₅₄₃，以(NH₄)₂SO₄浓度为横坐标，A₅₄₃为纵坐标制作标准曲线；

在含50mL氨氧化细菌筛选培养基的250mL三角瓶中，分别接入所述的13个菌株，每种菌株接种3瓶，28℃，180rpm培养36h；分别取样10mL，在8000rpm离心3min，测定上清液A₅₄₃，并根据标准曲线计算氨氮含量，按下列公式计算氨氮降解率：

氨氮降解率（%）=（起始氨氮含量-降解后氨氮含量）/起始氨氮含量×100

筛选得到对氨氮的降解能力最强的菌株Y12。

4.权利要求1－3中任何一项所述的肠球菌（Enterococcussp.）Y12在海水养殖池废水氨氮降解处理中的用途。