[发明专利]一种肠球菌Y12及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种菌株，特别是，一种肠球菌（Enterococcussp.）Y12，本发明还公开了该菌株的用途。

背景技术

水体富营养化是指在人类活动的影响下，大量氮、磷等富营养物质进入养殖池、湖泊、浅海等缓流水体，使得藻类等浮游生物爆发性繁殖，迅速消耗水体溶解氧，引起水质恶化，导致鱼类、虾蟹等水生生物大量死亡的现象。同时，由于水体的富营养化，水底堆积的有机物质被厌氧微生物分解产生有害气体以及一些浮游生物产生生物毒素，都对水产养殖动物产生重大威胁。因此，对于水产养殖业来说，水体富营养化是制约其发展的关键性问题。而水产养殖业由于工厂集约化养殖的快速发展，为追求经济效益，各养殖场常滥施药物以及大量使用人工饲料，导致养殖水体中经常出现氨氮污染现象，而氨氮污染是水体富营养化的主要原因之一。

近几年频繁发生的养殖水体氨氮污染事件，给水产养殖业，特别是海水养殖业带来了严重的经济损失。因此对养殖水体中氨氮浓度的控制以及如何高效地解决养殖水体中氨氮污染的问题，对水产养殖的发展有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的肠球菌（Enterococcussp.）Y12，该菌株为一种高效降氮的氨氧化细菌，可以用于海水养殖池废水处理，优化海水养殖环境。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供了肠球菌（Enterococcussp.）Y12的用途。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种肠球菌（Enterococcussp.）Y12，其特点是，其保藏号为CCTCCNo：M2015474。

本发明菌株肠球菌（Enterococcussp.）Y12（以下简称肠球菌Y12或者Y12）为从海水养殖池底泥样品中通过富集、分离出氨氧化细菌，模拟海水养殖废水筛选，获得高效降氮的氨氧化细菌。该菌株已于2015年7月23日保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCNo：M2015474；保藏单位地址：武汉市武汉大学，电话：027-68754052，邮编：430072。

本发明所述的肠球菌Y12，其优选的保藏方法为：将菌株接入含3%NaCl的LB培养基，在28℃，180rpm下培养24h，得发酵液；取1.5mL离心管，按1:1的比例将发酵液与灭过菌的30%甘油混合装入其中，颠倒数次混匀后放入-40℃冰箱保存。

本发明所述的肠球菌Y12，其分离筛选方法如下：

（1）富集：采集虾蟹贝混养池底泥5g，转入装有100mL已灭菌的氨氧化细菌富集培养基500mL三角瓶，再加入十多粒玻璃珠，在28℃，180rpm培养3d后，用移液器吸取5mL移入含有100mL新鲜富集培养基的500mL三角瓶中，再富集3d；依次类推，共富集三次；得富集液；氨氧化细菌富集培养基的配方是：胰蛋白胨5.0g，MgS0₄·7H₂O0.5g，FeS0₄·7H₂00.1g，KCl0.3g，陈海水1000mL，pH7.2；

（2）分离纯化：取1mL上述富集液转入装有9mL无菌水的试管中，混匀，按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-66个梯度稀释；分别吸取0.1mL涂布于氨氧化细菌分离培养基上并标记；分离培养基是在富集培养基基础上多加其质量的2%的琼脂；将已涂布的平板于28℃下培养48h；待菌落可用肉眼明显辨别时，借助放大镜仔细挑选出颜色、形态等特征有差异的单菌落，然后进行三区划线，于28℃下培养48h；重复三区划线分离单菌落直至得到纯培养物13个菌株，分别编号为Y1，Y2，Y3，Y4，Y5，Y6，Y7，Y8，Y9，Y10，Y11，Y12，Y13；

（3）筛选：

氨氧化细菌筛选培养基：葡萄糖5.0g，(NH₄)₂SO₄0.25g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.25g，陈海水1000mL，pH7.2；