[发明专利]一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法

权利要求书

1.一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法，其特征在于，方法步骤如下：

(1)制备九种合成着色剂混合母液：分别称取柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红标准品10mg于10mL容量瓶中，称取赤藓红100mg于10mL容量瓶中，各采用去离子水溶解并定溶，然后各分别移取1mL上述九种溶液于100mL容量瓶中，采用去离子水定溶得到九种合成着色剂混合母液；

(2)准备标准工作溶液：分别移取0.02mL、0.05mL、0.10mL、0.50mL、1.0mL和2.0mL九种合成着色剂混合母液于10mL容量瓶中，采用去离子水定溶，得到标准工作溶液系列；标准工作溶液含柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红的浓度范围均为0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL，赤藓红浓度范围为0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL；

(3)制备样品溶液：进行再造烟叶用辅料中合成着色剂的溶解、萃取与净化：称取0.2g～0.5g再造烟叶用辅料于50mL锥形瓶中，加入20mL去离子水溶解，超声提取10min，10000r/min离心5min，取10mL上清液上样到经3mL甲醇、3mL水活化的Strata-X-AW固相萃取柱上，然后用3mL水、3mL甲醇洗涤，洗涤后使用5mL5％氨化甲醇洗脱，洗脱液在40℃条件下氮气吹干，加入2mL去离子水溶解后，经0.22μm过滤膜后得到样品溶液；

所述再造烟叶用辅料是指再造烟叶生产过程中使用的涂布液或烟叶浸膏或烟梗浸膏或香精香料；

(4)进行液相色谱-串联三重四级杆质谱分析：采用液相色谱-串联三重四级杆质谱分析仪，分析检测的液相色谱、质谱条件如下：

色谱柱为AgilentSB-C18，柱温：30℃；流动相A为0.02mol/L乙酸铵的水溶液，流动相B为甲醇溶液；梯度洗脱，条件为0～5min：90％A～85％A，5.1～20min：85％A～30％A，20.1～23min：0％A，23.1～28min：90％A；流速：0.2mL/min，进样体积2μL；

离子源：采用电喷雾电离源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测MRM；电喷雾电压：500V；干燥气温度：325℃；干燥气流量：6L/min；鞘气温度：380℃；鞘气流量：10L/min；毛细管电压：4000V；

(5)绘制标准曲线及计算结果：分别吸取步骤(2)制备的不同浓度标准工作溶液进行LC-MS/MS分析，在步骤(4)确定的仪器参数下，以九种合成着色剂定量离子峰面积对其所对应的质量浓度进行线性回归，得到各目标化合物的标准工作曲线；再分别吸取步骤(3)制备的样品溶液进行LC-MS/MS分析，在步骤(4)确定的仪器参数下，得到九种合成着色剂定量离子峰面积，代入回归方程，计算得到样品溶液中九种合成着色剂浓度。

2.根据权利要求1所述的一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法，其特征在于，所述的去离子水达到GB/T6682中一级水的要求。

3.根据权利要求1所述的一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法，其特征在于，吹干洗脱液的氮气的纯度≥99.999％。