[发明专利]一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法

说明书

技术领域

本发明属于再造烟叶用辅料如再造烟叶生产过程中使用的涂布液、烟叶浸膏、烟梗浸膏、香精香料等化学成分分析测定技术领域，具体涉及一种采用液相色谱-串联质谱法检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法。

背景技术

随着人们对卷烟安全意识的提高，卷烟合成着色剂含量也受到越来越多的关注。加强对卷烟产品及原料中合成着色剂含量的控制，已成为烟草企业和大多数消费者的共识。烟用辅料(如再造烟叶用辅料)作为卷烟生产的重要环节之一，其安全性目前已受到行业内的高度重视。特别是对于再造烟叶安全性控制更为严格，因而控制再造烟叶用辅料中合成着色剂含量，对卷烟企业质量控制及保护消费者利益具有重要意义。

合成着色剂是指用人工化学合成方法所制的化合物，包括食用着色剂及其他用途的非食用着色剂。合成着色剂具有着色力强、色泽鲜艳、不易褪色、稳定性好、易溶解、成本低等特点，所以合成着色剂备受亲睐。为了使再造烟叶色泽艳丽，再造烟叶用辅料中通常都要添加合成着色剂。但发现不少食用合成着色剂具有致癌、致畸影响。

目前，国内针对食品中合成着色剂的测定已经有相关国家标准，并且已经制定了食品安全国家标准来规定各种着色剂的在不同种类食品中的限量。针对于烟草行业，未见国内关于合成着色剂的测定的相关国家标准。申请人通过前期探索，按GB/T5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》标准进行测定卷烟辅材中合成着色剂，以及采用行业高效液相色谱法测定再造烟叶中合成着色剂方法进行测定，发现这些方法均很难适用于再造烟叶用辅料特别是膏体、液体等样品的测定，主要是由于卷烟辅料中基质较为复杂，特别是涂布液基质更为复杂，采用上述2种方法测定这些样品，均容易出现假阳性，存在严重的检测定性定量不准确，无法判定等问题。

为此，基于液相色谱-串联三重四级杆质谱仪(LC-MS/MS)除具有普通高效液相色谱仪的分离功能，又具有质谱离子高选择性的优势，能够在定性定量时发挥更为精准的功能，探索开发采用液相色谱-串联三重四级杆质谱仪测定烟用辅料中合成着色剂含量的方法，对准确检测再造烟叶用辅料中的合成着色剂具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是解决再造烟叶用辅料基质复杂，出现假阳性，存在严重的检测定性定量不准确问题，提供一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法，方法步骤如下：

(1)制备九种合成着色剂混合母液：分别称取柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红标准品10mg于10mL容量瓶中，称取赤藓红100mg于10mL容量瓶中，各采用去离子水溶解并定溶，然后各分别移取1mL上述九种溶液于100mL容量瓶中，采用去离子水定溶得到九种合成着色剂混合母液；

(2)准备标准工作溶液：分别移取0.02mL、0.05mL、0.10mL、0.50mL、1.0mL和2.0mL九种合成着色剂混合母液于10mL容量瓶中，采用去离子水定溶，得到标准工作溶液系列；标准工作溶液含柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红的浓度范围均为0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL，赤藓红浓度范围为0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL；

(3)制备样品溶液：进行再造烟叶用辅料中合成着色剂的溶解、萃取与净化：称取0.2g～0.5g再造烟叶用辅料于50mL锥形瓶中，加入20mL去离子水溶解，超声提取10min，10000r/min离心5min，取10mL上清液上样到经3mL甲醇、3mL水活化的Strata-X-AW固相萃取柱上，然后用3mL水、3mL甲醇洗涤，洗涤后使用5mL5％氨化甲醇洗脱，洗脱液在40℃条件下氮气吹干，加入2mL去离子水溶解后，经0.22μm过滤膜后得到样品溶液；

所述再造烟叶用辅料是指再造烟叶生产过程中使用的涂布液或烟叶浸膏或烟梗浸膏或香精香料；

(4)进行液相色谱-串联三重四级杆质谱分析：采用液相色谱-串联三重四级杆质谱分析仪，分析检测的液相色谱、质谱条件如下：