[发明专利]一种同时检测人冠状病毒229E，OC43，NL63和HKU1的实时荧光多重RT-PCR方法

权利要求书

1.一种检测冠状病毒的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括4对引物，分别特异性结合于以下基因并用于扩增对应于所述各基因的特异性扩增产物：冠状病毒229E的M基因、冠状病毒OC43的N基因、冠状病毒NL63的N基因和冠状病毒HKU1的N基因；

并且，所述引物组合包括下述的第一、二、三和四引物对：

第一引物对：

229E-F引物：序列如SEQ ID NO: 1所示；

229E-R引物：序列如SEQ ID NO: 2所示；

第二引物对：

OC43-F引物：序列如SEQ ID NO: 3所示；

OC43-R引物：序列如SEQ ID NO: 4所示；

第三引物对：

NL63-F引物：序列如SEQ ID NO: 5所示；

NL63-R引物：序列如SEQ ID NO: 6所示；和

第四引物对：

HKU1-F引物：序列如SEQ ID NO: 7所示；

HKU1-R引物：序列如SEQ ID NO: 8所示。

2.一种PCR扩增体系，其特征在于，所述的体系包括：用于扩增的缓冲体系以及位于所述扩增体系中的权利要求1所述的引物组合。

3.一种同时检测冠状病毒229E，OC43，NL63和HKU1的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括(a)容器，和(b)位于所述容器中的如权利要求1所述的引物组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：

第一容器，以及位于所述第一容器中的如权利要求1所述的第一引物对；

第二容器，以及位于所述第二容器中的如权利要求1所述的第二引物对；

第三容器，以及位于所述第三容器中的如权利要求1所述的第三引物对；和

第四容器，以及位于所述第四容器中的如权利要求1所述的第四引物对，

其中，所述的第一容器、第二容器、第三容器、第四容器可以是各自独立的或为同一容器。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还含有(c)缓冲剂和dNTP；和(d) 荧光染料。

6.一种同时检测冠状病毒229E，OC43，NL63和HKU1的非诊断性方法，其特征在于，包括步骤：

(a) 利用如权利要求1所述的引物组合，对检测样品进行实时荧光多重RT-PCR。

7.根据权利要求6所述的非诊断性方法，其特征在于，包括步骤：

(b)分析扩增产物的溶解曲线，从而判定所述检测样品中冠状病毒229E，OC43，NL63和HKU1的存在与否和/或数量。

8.根据权利要求7所述的非诊断性方法，其特征在于，所述步骤(b)包括分析不同扩增产物的溶解峰图和/或溶解温度。