[发明专利]核酸扩增反应装置和核酸检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸扩增反应装置和核酸检测方法。

背景技术

近年来，因基因利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用基因 的医疗受到瞩目，除此之外，在农业、畜牧业领域也开发出多种将基因 用于鉴别品种、改良品种的方法。作为用于利用基因的技术，PCR(聚 合酶链式反应，PolymeraseChainReaction)法等核酸扩增技术正在广 泛普及。

核酸扩增技术中，作为同时检测多个基因的方法，已知有多重PCR (例如，参照专利文献1)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2010-207220

发明内容

但是，在多重PCR中，对一个反应液中的多个基因进行检测时， 因为使用多个各基因用引物对，所以为了区别扩增的基因而需要对应基 因个数的不同种类的荧光色素和对应各荧光色素的检测体系，除此之 外，由于各引物间的干涉等而反应有时进行不充分，反应条件的构建困 难。

本发明的课题在于提供一种能够在一个反应体系中对多个基因分 别在短时间内正确且简便地进行检测的核酸扩增反应装置和核酸检测 方法。

本发明是为了解决上述课题的至少一部分而进行的，能够以下述方 式实现。

本发明的一个实施方式为核酸扩增反应装置，包含：安装部，可安 装填充有核酸扩增反应液和与核酸扩增反应液相比比重小且不与核酸 扩增反应液混和的液体的核酸扩增反应容器；第1温度调整部，对核酸 扩增反应容器的第1区域的温度进行调整；第2温度调整部，对核酸扩 增反应容器的第2区域的温度进行调整；和驱动机构，对第1配置和第 2配置进行切换，所述第1配置为第1区域在重力作用的方向上位于第 2区域的下方、所述第2配置为第2区域在重力作用的方向上位于第1 区域的下方；并且，核酸扩增反应液含有用于使第1核酸扩增的第1引 物对和用于使第2核酸扩增的第2引物对，第1引物对的对上述第1核 酸的能够退火的温度区域与第2引物对的对第2核酸的能够退火的温度 区域的重叠部分为10℃以下，对于上述核酸扩增反应液，将第1区域的 温度调整为第1温度，将第2区域的温度调整为低于第1温度的第2温 度来进行第1热循环后，将第1区域的温度调整为第3温度，将第2区 域的温度调整为低于第3温度且与2温度不同的第4温度来进行第2热 循环。第2温度可以高于上述第4温度。第2温度与第1引物对和上述 第1核酸的最佳退火温度的温度差可以为5℃以内，并且可以为1℃以 内。第4温度与第2引物对和上述第2核酸的最佳退火温度的温度差可 以为5℃以内，并且可以1℃以内。第1热循环为重复第1温度和第2 温度的2个阶段的温度变化的热循环，在第2温度中，第1核酸可以扩 增且第2核酸不可以扩增，此外，第2热循环为重复第3温度和第4温 度的2阶段的温度变化的热循环，在第4温度中，第2核酸可以扩增且 第1核酸不可以扩增。