[发明专利]一种胎盘羊膜间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法

权利要求书

1.一种胎盘羊膜间充质干细胞的冻存保护液，包括

DMSO10v/v％-20v/v％

胎盘羊膜间充质干细胞条件培养基30v/v％-80v/v％

胎牛血清10v/v％-50v/v％。

2.根据权利要求1所述的冻存保护液，所述胎盘羊膜间充质干细胞条件培养基的制备方法为：取P1-P5代的胎盘羊膜间充质干细胞酶解消化后传代，连续培养24-72h后，收集培养上清，离心后取上清。

3.根据权利要求2所述的冻存保护液，所述胎盘羊膜间充质干细胞条件培养基的制备方法中所述酶解消化具体为向细胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²的0.05％-0.3％的胰酶和0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，完全培养基终止酶解。

4.根据权利要求2所述的冻存保护液，所述胎盘羊膜间充质干细胞条件培养基的制备方法中所述传代为酶解消化后的细胞离心，完全培养基重选后，按80000个细胞/cm²-15000个细胞/cm²的传代密度传代，细胞连续生长24h-72h。

5.根据权利要求2所述的冻存保护液，所述胎盘羊膜间充质干细胞条件培养基的制备方法中所述离心为200g-400g离心5min。

6.权利要求1所述胎盘羊膜间充质干细胞的冻存保护液的制备方法，按比例将胎盘羊膜间充质干细胞条件培养基与胎牛血清混合，然后加入DMSO，冰水浴中降温至0℃。

7.一种胎盘羊膜间充质干细胞的冻存方法，将胎盘羊膜间充质干细胞消化离心后，加入胎盘羊膜间充质干细胞条件培养基，调整细胞密度至0.1×10⁶个/mL-10×10⁶个/mL，加入等体积的权利要求1所述胎盘羊膜间充质干细胞的冻存保护液，混匀后，分装至冻存管中，-80℃中冻存1天-5天，转移至液氮中长久保存。

8.根据权利要求7所述的冻存方法，所述消化为向细胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²的0.05％-0.3％的胰酶和0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，用5倍-10倍于消化液的完全培养基终止酶解。

9.一种胎盘羊膜间充质干细胞的冻存试剂盒，包含权利要求1所述胎盘羊膜间充质干细胞的冻存保护液。