[发明专利]一种非衍生快速检测药用植物中结合氨基酸的方法

权利要求书

1.一种非衍生同时快速检测药用植物中结合氨基酸的分析方法，包括以下步骤：

（1）高压脉冲酸水解结合氨基酸和水解液的冷冻及再融化分析前处理：

取待测药用植物1.0g于水解管中，加入6mol×L^-1盐酸溶液，除氧密封，设置电场强度10kv×cm^-1-30kv×cm^-1，料液比1:5-1:15和脉冲时间30-90S进行高压脉冲法水解，待冷却至室温后将水解液放置零下20-60度冷冻2-4小时，然后取出常温溶化，随后过滤，取滤液1mL氮吹仪吹干，用流动相溶解，过0.22μm滤膜过滤备用；

超高压液相色谱-蒸发光散射检测方法建立：

准确称取各标准品用0.1mol×L^-1盐酸配制成0.5-10nmol×L^-1的氨基酸标准液，采用Hilic色谱柱，Amide色谱柱以及亲水性C18色谱柱对其进行分离，以乙腈-水含（0.1-1％九氟丁酸溶液和三氟乙酸）为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱（A为离子对乙腈相，B为离子对水相）：0-0.8min，0％A；0.8-1.5min，12％A；1.5-4min，15％A；4-5min，61％A；5.1-8min，61％A；8-8.1min，0％A；8.1-10min，0％A；分析时间10min；

设置流速0.3-0.5ml×min^-1，ELSD飘移管温度60-80℃，载气流量20-40PSI上UPLC-ELSD检测；

各浓度分别进样2μL测其峰面积，以进样浓度的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标绘制标准曲线；

药用植物中氨基酸含量测定：

按照上述液相色谱条件，对药用植物水解待测液样品中的氨基酸进行分离检测：进样2μL，测定峰面积，根据标准曲线计算药用植物中氨基酸的含量。

2.权利要求1所述的一种非衍生同时快速检测药用植物中结合氨基酸的分析方法，其特征在于：

步骤（1）为：

取待测药用植物1.0g于水解管中，加入6mol×L^-1盐酸溶液，除氧密封好，设置电场强度为20kv×cm^-1，料液比1:10和脉冲时间为90S进行高压脉冲法水解，待冷却至室温后将水解液放置零下20-60度冷冻2-4小时，然后取出常温溶化，随后过滤完取滤液1mL氮吹仪吹干，流动相溶解后，过0.22μm滤膜过滤备用。

3.权利要求1所述的一种非衍生同时快速检测药用植物中结合氨基酸的分析方法，其特征在于：

步骤（2）为：

准确称取各标准品用0.1mol×L^-1盐酸配制成0.5-10nmol×L^-1的氨基酸标准液，采用亲水性硅胶色谱柱分离，以乙腈-水（均含0.7％九氟丁酸和0.5％三氟乙酸）为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱（A为离子对乙腈相，B为离子对水相）：0-0.8min，0％A；0.8-1.5min，12％A；1.5-4min，15％A；4-5min，61％A；5.1-8min，61％A；8-8.1min，0％A；8.1-10min，0％A；分析时间10min；设置流速0.4mL×min^-1，ELSD飘移管温度70℃，载气流量30psi上UPLC-ELSD检测；各浓度分别进样2μL测其峰面积，以进样浓度的对数为横坐标，峰面积的对数为纵坐标绘制标准曲线。