[发明专利]估算烟草N导入片段左端长度的分子标记、引物及方法在审
申请号: | 201510724946.7 | 申请日: | 2015-10-30 |
公开(公告)号: | CN105200052A | 公开(公告)日: | 2015-12-30 |
发明(设计)人: | 刘勇;李永平;方敦煌;黄昌军;陈姝敏;于海芹;肖炳光 | 申请(专利权)人: | 云南省烟草农业科学研究院 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/6895 |
代理公司: | 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 | 代理人: | 陈左;于洪 |
地址: | 650021*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 估算 烟草 导入 片段 左端 长度 分子 标记 引物 方法 | ||
1.一种估算烟草
以GL4.06引物对或GL3.50引物对为引物,以待检测的包含
当以所述的GL4.06引物对进行PCR 扩增,如果扩增出391bp大小的DNA片段,即Seq IDNo.1所示序列的分子标记,则表明被检测烟草的
当以所述的GL3.50引物对进行PCR 扩增,如果扩增出654bp大小的DNA片段,即Seq IDNo.2所示序列的分子标记,则表明被检测烟草的
所述的GL4.06引物对的序列如下:
GL4.06-F1:5’-gatcccacgagtggagca-3’,
GL4.06-R1:5’-tcctcaccaaacccaacttt-3’;
所述的GL3.50引物对的序列如下:
GL3.50-F1:5’-ttgagaaccgtccaatttcc -3’,
GL3.50-R1:5’-cccctgagtcgaacaagtcaa-3’。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的PCR 的反应体系如下:
DNA模板50 ng/μL 2.5 μL,
10×PCR buffer 2.0 μL,
dNTPs 2.5mM 1.2 μL,
引物对中的引物10umol/μL 各1.5 μL,
Ex-Taq DNA酶5U/μL 0.3 μL,
ddH
总体积为20 μL。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的PCR反应程序:94℃预变性5min;然后进入35个循环:94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s;循环结束后72℃延伸10min;4℃保存。
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