[发明专利]一种蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法

权利要求书

1.一种蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是包括以下步骤：

(1)限制性酶解：取蓝圆鯵，粉碎后加水，调节温度为50～60℃，加入复合酶酶解，酶解至水解度为12～20％，灭酶后离心，取上清液，得酶解液；

(2)超滤分离：将酶解液过截留分子量为1～10kDa的超滤膜，取滤过液；

(3)凝胶层析柱分离：将滤过液通过葡聚糖凝胶层析柱，采用洗脱液洗脱，分段收集洗脱液各组分，抗氧化性最好的组分即为抗氧化肽；

(4)肽与钙离子的螯合：在抗氧化肽中加入钙盐，调节pH值为5.0～10.0、温度为35～90℃进行螯合反应5～120min后浓缩和干燥，即得蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽。

2.根据权利要求1所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：步骤(1)中蓝圆鯵和水的质量份配比为1:1～4。

3.根据权利要求1所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：步骤(1)中所述的复合酶为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中的两种或全部，其用量为蓝圆鯵总质量的0.2～0.8％。

4.根据权利要求1所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：步骤(1)中灭酶时温度为85～95℃，时间为10～30min。

5.根据权利要求1所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：步骤(1)中离心时离心机的转速为4000～8000r/min，离心时间为15～40min。

6.根据权利要求1所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：步骤(3)中所述的洗脱液为超纯水，抗氧化性最好的组分即为抗氧化肽的确定方式为：分段收集洗脱液各组分，同时检测收集的各组分的DPPH自由基清除率和OH自由基清除率，根据DPPH自由基清除率和OH自由基清除率检测结果，收集DPPH自由基清除率和OH自由基清除率最高的组分即为抗氧化性最好的组分也即是抗氧化肽。

7.根据权利要求6所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：采用分光光度计比色法检测DPPH自由基清除率和OH自由基清除率。

8.根据权利要求1所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：步骤(4)中所述的钙盐为氯化钙或硫酸钙，其与抗氧化肽的质量比为1:1～30。

9.根据权利要求1所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，其特征是：步骤(4)中所述的浓缩为真空浓缩，所述的干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。

10.采用权利要求1-9任一项所述的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法制成的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽。