[发明专利]一种蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于钙离子螯合肽技术领域，具体涉及一种以蓝圆鲹为原料制备具有抗氧化活性的钙离子螯合肽的方法及由该方法制成的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽。

背景技术

肽-矿物离子螯合物是一种金属有机化合物，它是由矿物离子与肽通过螯合反应制备而得的，其能够借助肽类在机体内的吸收机制提高金属离子的生物利用率，具备无机态金属离子所没有的生理生化特性。目前，以人体必需的微量元素与肽螯合后制得的螯合物已成为一种新型矿物离子补充剂，越来越受到人们的重视。

同时由于特定分子量及氨基酸序列的肽类物质还具有较好的抗氧化活性，因此肽-矿物离子螯合物不仅具有促进矿物离子吸收的活性，还可能具备较高的抗氧化等生物活性，具有很大的研发价值。

近年来，以食源性蛋白为原料采用酶解法制备抗氧化肽已取得了很大的进展，获得了较多具有高抗氧化活性的肽段。但目前关于以蓝圆鲹为原料制备具有抗氧化活性的钙离子螯合肽的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法。

本发明的目的还在于提供上述蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法制成的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽。

本发明的第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)限制性酶解：取蓝圆鯵，粉碎后加水，调节温度为50～60℃，加入复合酶酶解，酶解至水解度为12～20％，灭酶后离心，取上清液，得酶解液；

(2)超滤分离：将酶解液过截留分子量为1～10kDa的超滤膜，取滤过液；

(3)凝胶层析柱分离：将滤过液通过葡聚糖凝胶层析柱，采用洗脱液洗脱，分段收集洗脱液各组分，抗氧化性最好的组分即为抗氧化肽；

(4)肽与钙离子的螯合：在抗氧化肽中加入钙盐，调节pH值为5.0～10.0、温度为35～90℃进行螯合反应5～120min后浓缩和干燥，即得蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽。

在上述蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法中：

步骤(1)中蓝圆鯵和水的质量份配比优选为1:1～4。

步骤(1)中所述的复合酶优选为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中的两种或全部，其用量优选为蓝圆鯵总质量的0.2～0.8％。

步骤(1)中灭酶时温度优选为85～95℃，时间优选为10～30min。

步骤(1)中离心时离心机的转速优选为4000～8000r/min，离心时间优选为15～40min。

步骤(3)中所述的洗脱液为超纯水，抗氧化性最好的组分即为抗氧化肽的确定方式为：分段收集洗脱液各组分，同时检测收集的各组分的DPPH自由基清除率和OH自由基清除率，根据DPPH自由基清除率和OH自由基清除率检测结果，收集DPPH自由基清除率和OH自由基清除率最高的组分即为抗氧化性最好的组分也即是抗氧化肽。

本发明优选采用分光光度计比色法检测DPPH自由基清除率和OH自由基清除率。

步骤(4)中所述的钙盐优选为氯化钙或硫酸钙，其与抗氧化肽的质量比优选为1:1～30。

步骤(4)中所述的浓缩优选为真空浓缩，所述的干燥优选为冷冻干燥或喷雾干燥。

本发明的第二个目的是通过以下技术方案来实现的：采用上述蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法制成的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

(1)本发明中的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽具有促进钙离子吸收的生物活性，同时具有较好的抗氧化活性；

(2)本发明中的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备工艺较为简便，产品安全，可应用于实际生产。

附图说明

图1是本发明实施例1中根据DPPH自由基清除率和OH自由基清除率检测结果，收集DPPH自由基清除率和OH自由基清除率最高的组分B的过程。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

本实施例提供的蓝圆鯵抗氧化钙离子螯合肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)以蓝圆鯵为原料，取肉绞碎，按照1:2的料水重量比加水，水温调节至55℃，同时加入木瓜蛋白酶与中性蛋白酶，酶的加入量为蓝圆鯵总质量的0.5％，酶解至水解度为15％，85℃灭酶20min，再以转速为5000r/min离心25min，取上清液，得酶解液；

(2)将酶解液过截留分子量为10kDa的超滤膜，取滤过液；