[发明专利]一种1型鸭甲肝病毒VP2重组蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种1型鸭甲肝病毒VP2重组蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法，所述的1型鸭甲肝病毒VP2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述的制备方法，包括以下步骤：获取VP2目的片段；构建重组表达质粒pProEx‑HTb‑VP2；制备VP2重组蛋白。成功获得VP2重组蛋白表达于非可溶性包涵体中，并且与兔抗DHAV‑1血清具有良好的反应原性，说明DHAV‑1的VP2蛋白成功获得了原核表达。以表达的VP2重组蛋白建立了检测1型鸭甲肝病毒抗体的ELISA试剂盒，为DHAV‑1抗体的检测及进一步开展DHAV‑1的相关研究提供试验数据和基础材料。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种1型鸭甲肝病毒VP2重组蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法。

背景技术

鸭甲肝病毒(Duck Hepatitis A Virus，DHAV)能引起雏鸭爆发鸭病毒性肝炎，其具有发病急、病程短、传播迅速、病死率高等特点，临床上主要表现为食欲减退、神经症状、突然死亡和肝脏肿大出血，又称歪脖病。目前几乎遍布世界各个养鸭国家和地区，给养鸭业带来了较大的经济损失。DHAV可分为DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3三个基因型。DHAV-1是引起鸭病毒性肝炎最主要的一种病原，分布最为广泛且致病性强、感染率高，对雏鸭致死率可高达90％以上。目前几乎遍布世界各个养鸭国家和地区，给养鸭业带来了较大的经济损失。

根据疾病的流行病学特点、特征性临床症状和有诊断意义的剖解病变，一般可做出初步诊断，但是确诊尚需借助实验室检测。检测DHAV的实验室方法众多，各有优缺点，中和试验是最经典的方法，虽然结果准确，但是操作费时，不适合临床检测。随着DHAV基因组全序列的陆续公布，RT-PCR技术、环介导的恒温扩增技术(LAMP)等一系列分子生物学新技术孕育而生，为该病毒的检测提供了快捷、高效的方法。而用于该病抗体检测的ELISA方法操作简单，容易掌握，不需要高端精密的仪器设备，易于推广。目前针对鸭甲肝病毒抗体检测的ELISA方法为间接ELISA，但现有的间接ELISA方法依然存在耗时长、花费大、纯化蛋白量小，不能规模化生产。

小RNA病毒是RNA病毒中最小的一类，分布极为广泛，可归为肠道病毒属(enterovirus)、口疮病毒属(Aphthovirus)、心病毒属(Cardiovirus)、嗜肝病毒属(Hepatovirus)、副肠孤病毒属(Parechovirus)、马鼻病毒属(Erbovirus)、嵴病毒属(Kobuvirus)、捷申病毒属(Teschovirus)、禽肝炎病毒属(Avihepatovirus)等。小RNA病毒呈圆形，病毒粒子直径为20～40nm，无囊膜，病毒的结构蛋白(衣壳蛋白)一般包括VP1、VP2、VP3和VP4。其中VP4埋在粒子内部，处于蛋白外壳的内部与基因组RNA相连接。VP1、VP2、VP3暴露在病毒表面，组成一个亚单位。VP2蛋白位于衣壳表面，含有抗原表位并且有些抗原表位可诱导机体产生中和抗体，衣壳蛋白VP2和促凋亡蛋白/凋亡前体蛋白Siva间存在相互作用，柯萨基病毒B3 VP2蛋白可能特异地结合到凋亡前体蛋白Siva上，从而影响细胞凋亡的诱导、病毒的扩散以及病毒导致的病理学进程，但对DHAV衣壳蛋白的研究相对很少。生物信息学分析和推测表明，DHAV的衣壳蛋白可能为VP1、VP3和VP0，而不是像其他小RNA病毒那样为VP1、VP2、VP3和VP4，因此DHAV到底是VP0还是VP2和VP4，他们是否位于暴露在病毒表面及抗原性如何目前未见报道。

由此可见，能否对VP2蛋白进行深入研究，基于鸭甲肝病毒的VP2蛋白建立一种重组蛋白的方法，使得纯化获得的蛋白纯度高，并且建立间接ELISA方法，使其敏感性、重复性及特异性好，操作简便，可规模化生产成为本领域技术人员亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，提供一种1型鸭甲肝病毒VP2重组蛋白、ELISA试剂盒及其制备方法。

本发明技术方案包括以下内容：