[发明专利]一种检测小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷含量的方法

权利要求书

1.一种检测小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷含量的方法，包括如下步骤：

(1)测定荧光共振能量转移探针于526nm处的荧光发射峰的强度，记作F₀；

(2)向所述荧光共振能量转移探针中加入待测的小牛血清去蛋白注射液进行反应；测定所述反应后的体系于526nm处的荧光发射峰的强度，记作F；

(3)根据式(1)所示的Stern-Volmer方程，即能计算出所述小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷的含量；

F0F=1+kQτ0[Q]=1+KD[Q]---(1)]]>

式(1)中，[Q]表示待测小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷的摩尔浓度，τ₀表示所述荧光共振能量转移探针的平均荧光寿命，为1.5×10^-9s，k_Q表示荧光淬灭速率常数，为1.2×10¹¹L·mol^-1·s^-1，K_D表示Stern-Volmer常数；

所述荧光共振能量转移探针的能量供体和能量受体分别为β-环糊精修饰的ZnS量子点和三羟基黄酮，所述β-环糊精修饰的ZnS量子点的粒径为2～4nm；所述荧光共振能量转移探针的pH值为4.5；

所述待测的小牛血清去蛋白注射液是按照包括如下步骤的方法进行前处理的：

1)向所述待测的小牛血清去蛋白注射液中加入NaOH水溶液，并进行煮制，将体系的pH值调至6.8～7.2；

2)向步骤1)处理后的体系中计入活性炭进行吸附；

3)将步骤2)处理后的体系用微孔膜进行过滤；

4)对经步骤3)处理后的体系进行固相萃取，洗脱剂为甲醇，收集洗脱液，即完成对所述小牛血清去蛋白注射液的前处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述反应的温度为20℃～25℃，所述反应的时间为10～20min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述NaOH水溶液的摩尔浓度为6mol/L，所述NaOH水溶液与所述待测的小牛血清去蛋白注射液的体积比可为1：1；

在水浴的条件下进行煮制；所述煮制的温度为59～61℃，时间为35～45min。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述活性炭的质量加入量为所述待测的小牛血清去蛋白注射液质量的1.8％～2.0％。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中，所述微孔膜的孔径为0.22μm。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：步骤4)中，所述固相萃取的固体吸附剂为C18。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：所述荧光共振能量转移探针中，所述β-环糊精修饰的ZnS量子点的摩尔浓度可为5.0×10^-5～7.5×10^-5mol/L，具体可为5.0×10^-5mol/L，所述三羟基黄酮的摩尔浓度可为1.0×10^-6～2.5×10^-6mol/L，具体可为2.5×10^-6mol/L；

所述β-环糊精修饰的ZnS量子点与所述三羟基黄酮的摩尔比为20：1。