[发明专利]一种检测小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测单磷酸腺苷含量的方法，具体涉及一种小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷含量的方法，属于检测技术领域。

背景技术

小牛血清去蛋白药物是小牛血清经去蛋白、浓缩、超滤等工艺制备的一类生物药，该类药物中含有小分子多肽、核苷酸、低聚糖等诸多生物活性成份。研究表明该类药物能够在缺氧情况下刺激并增加机体对葡萄糖和氧的吸收与利用，改善代谢平衡。它能够刺激细胞呼吸活性，对缺氧环境下的诱导神经细胞有保护作用。同时，它还具有抑制血小板聚集和血栓形成的作用，起到保护细胞在缺血缺氧的环境下的生存能力。

临床实验发现，小牛血清去蛋白药物可用于治疗脑部血液循环障碍和营养障碍性疾病所引起的神经功能缺损而表现出的各种脑功能不全疾病，如缺血性脑梗塞、脑出血等；该药物也被证实能够通过刺激胶原质的合成加速伤口愈合过程，其对放射所致的损伤也有很好的治疗效果。它还用于辅助治疗消化系统疾病，对肝损伤有保护作用。研究还表明该类药物可以通过增加神经元和突触数量起到神经保护的作用来治疗神经系统疾病，在辅助治疗老年痴呆症也取得了一定的效果。

小牛血清去蛋白药物的药理药效与其生物活性成份密切相关，因此研究其活性成份的检测方法，可为进一步了解其药理活性提供科学依据。该类药物的活性成份之一为单磷酸腺苷(Adenosinemonophosphate，简称AMP)，是一种在核糖核酸(RNA)中发现的核苷酸。它是一种磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸盐官能团、戊糖核酸糖及碱基腺嘌呤所组成。

荧光共振能量转移(FluorescenceResonanceEnergyTransfer，FRET)体系，是指当两个荧光分子距离靠近时(小于10nm)发生的能量转移现象，其中一个作为能量供体，另外一个为能量受体。FRET体系可以使能量受体的荧光发射强度显著增强，因此可以明显提高基于此原理设计的荧光探针传感器的检测能力。近年来，以量子点为基础的荧光共振能量转移探针备受关注，广泛应用于小分子的识别、金属离子的检测、生物大分子的检测、细胞成像以及疾病诊断等方面。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷(AMP)的方法，具体是利用一种荧光共振能量转移探针件检测，本发明方法通过对样品的前处理，提高了对单磷酸腺苷的选择性，排除了样品中其他杂质的干扰。

本发明所提供的检测小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷含量的方法，包括如下步骤：

(1)测定荧光共振能量转移探针于526nm处的荧光发射峰的强度，记作F₀；

(2)向所述荧光共振能量转移探针中加入待测的小牛血清去蛋白注射液进行反应；测定所述反应后的体系于526nm处的荧光发射峰的强度，记作F；

(3)根据式(1)所示的Stern-Volmer方程，即能计算出所述小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷的含量；

F0F=1+kQτ0[Q]=1+KD[Q]---(1)]]>

式(1)中，[Q]表示待测小牛血清去蛋白注射液中单磷酸腺苷的摩尔浓度，τ₀表示所述荧光共振能量转移探针的平均荧光寿命，为1.5×10^-9s，k_Q表示荧光淬灭速率常数，为1.2×10¹¹L·mol^-1·s^-1，K_D表示Stern-Volmer常数；