[发明专利]具有双淋巴靶向的抗肿瘤药物载体制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及纳米材料的制备领域，具体的涉及一种具有双淋巴靶向的抗肿瘤药物载体制备方法。

背景技术

淋巴转移是实体瘤的重要转移形式，也是肿瘤导致患者死亡的重要原因。据统计，临床上60％恶性肿瘤患者初诊时即已发生淋巴转移，且目前尚无一种有效的手段加以控制和治疗。因此，对淋巴转移肿瘤进行靶向治疗的应用基础研究具有重要的临床现实意义。

透明质酸(hyaluronicacid,HA)是构成细胞外基质和胞间质的只要成分，在维持细胞外基质结构及调节细胞内活动方面都起着重要的作用。HA不但具有良好的生物相容性、可降解性、高粘弹性及非免疫原性等物理化学和生物学性质，它可以与肿瘤细胞表面过量表达的受体CD44相结合。因此，借助HA具有的肿瘤靶向性，以其为靶向材料构建肿瘤靶向药物传递系统，己经成为当前靶向治疗肿瘤的研究热点。

LyP-1(CGNKRTRGC)是-种通过噬菌体展示技术甄选得到的环状九肽，其不仅对肿瘤具有靶向性，而且对淋巴转移肿瘤也具有靶向能力。LyP-1对原位肿瘤和淋巴转移肿瘤的靶向性是基于其与p32蛋白的特异性结合而实现的。(FogalV,ZhangL,KrajewskiS,etal.Mitochondrial/cell-surfaceproteinp32/gClqRasamoleculartargetintumorcellsandtumorstroma[J].CancerRes,2008,68(17):7210-7218.)最近研究表明，p32蛋白不仅在肿瘤细胞有表达，而且在肿瘤淋巴管和肿瘤相关巨噬细胞也存高表达，使其成为肿瘤诊断和治疗的一个潜在靶点。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，以临床中使用最广泛的抗肿瘤药物为基础，公开一种具有双淋巴靶向的药物载体的制备方法。制备以HA和LyP-1分子为基础的靶向分子，可以实现靶向定位正常淋巴结中的肿瘤细胞及其转移灶，进而可以制备对正常淋巴结中的肿瘤细胞及其转移灶具有靶向作用的载体材料，并赋予其多功能特性。该载体材料通过双级靶向作用靶向定位正常淋巴结中的肿瘤细胞及其转移灶，即一方面通过HA分子使得载体材料通过静脉注射后，经淋巴管主动转运后进入淋巴结；另一方面通过LyP-1使得载体材料实现对淋巴结中的肿瘤细胞及其转移灶的靶向定位。

本申请的目的是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本发明提供一种具有双淋巴靶向的抗肿瘤药物载体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

载药壳聚糖纳米粒子制备：将抗肿瘤药物溶液加入到壳聚糖溶液中，搅拌；再加入三聚磷酸钠溶液，再搅拌，即得载药壳聚糖纳米粒子；

双淋巴靶向抗肿瘤药物载体制备：将所述载药壳聚糖纳米粒子分散于水中，加入交联剂、透明质酸钠、LyP-1，搅拌，即得双淋巴靶向抗肿瘤药物载体。

优选地，所述抗肿瘤药物包括阿霉素、奥沙利铂、卡铂，奈达铂、阿柔比星、多柔比星注射液、表柔比星注射液、米托蒽醌注射液、博莱霉素注射液、平阳霉素、丝裂霉素注射液、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、达沙替尼、阿立必利、阿扎司琼、昂丹司琼、氯磷酸、美司钠、利妥昔单抗、替伊莫单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、阿那曲唑，氨鲁米特，福美坦，依西美坦片糖衣、替尼泊苷、依托泊苷，喷司他丁、伊立替康、白消安、氮芥、卡莫斯丁、罗莫司丁、高三尖杉酯碱、门冬酰胺酶、培门冬酶、阿糖胞苷注射液、氟脲苷、吉西他滨、卡莫氟、多西他赛注射液、长春地辛、长春新碱、紫杉醇、索拉菲尼、地西他滨、丙卡巴肼中的至少一种；

所述交联剂为四异氰酸酯、丙二胺、聚乙二醇、聚丙二醇、三羟甲基丙烷、聚丙二醇缩水甘油醚、a-甲基苯乙烯、丙烯腈、丙烯酸、甲基丙烯酸、乙二醛、正硅酸乙酯、正硅酸甲酯、三甲氧基硅烷、对甲苯磺酸、对甲苯磺酰氯、二丙烯酸-1，4-丁二醇酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、丙烯酸丁酯、过氧化二异丙苯、过氧化双2，4一二氯苯甲酰、丙烯酸、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟丙酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸羟丙酯、二乙烯基苯、N-羟甲基丙烯酰胺、双丙酮丙烯酰胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐中的至少一种。

优选地，载药壳聚糖纳米粒子制备的步骤中，所用溶液的重量份数包括：

抗肿瘤药物溶液5～6份，

壳聚糖溶液4～5份，

三聚磷酸钠溶液1～2份。

优选地，载药壳聚糖纳米粒子制备的步骤中，所述再搅拌后得到载药壳聚糖纳米粒子的悬浮液，对所述悬浮液离心、冷冻干燥可得载药壳聚糖纳米粒子的粉末；