[发明专利]一种利用海藻酸钠水凝胶制备细胞膜片的方法

权利要求书

1.一种制备细胞膜片所用的基底材料，其特征在于，由如下方法制备得到：

S1.称取海藻酸钠溶于纯水中，加入高碘酸钠，避光搅拌反应1～2h；

S2.向S1得到的溶液中加入乙二醇，继续反应0～2h；

S3.将S2反应后的溶液进行透析3～7天，勤换水；

S4.透析完毕后，真空冷冻干燥，得到氧化的海藻酸钠；

S5.称取氧化的海藻酸钠和海藻酸钠，配置成总海藻酸钠浓度为1～5%w/v的混合溶液，向混合溶液中加入氯化钠，使氯化钠终浓度为2mol/L以下；

S6.将S5所得产物加入培养板的孔中，置于-80℃冷冻5～18h后，真空冷冻干燥；

S7.将S6处理后的培养板置于无水乙醇中浸没完全，再缓缓加入2%氯化钙溶液对材料进行交联，最后，使用去离子水洗涤去除残余于材料中的氯化钙溶液；

S8.将S7处理后的培养板灭菌后，利用生物大分子对其进行交联改性，得到表面改性的海藻酸钠水凝胶，即为制备细胞膜片所用的基底材料；

其中，步骤S8所述利用生物大分子对其进行交联改性包括以下3种方式：

（1）加入COL-I溶液进行交联；

（2）加入EDC/NHS浸泡12 h，再加入明胶12 h后，最后再加入EDC/NHS，摇床混匀进行交联；

或（3）加入pH4.5~4.7的RGD，再分次少量加入EDC/NHS，摇床混匀进行交联。

2.根据权利要求1所述基底材料，其特征在于，步骤S1所述高碘酸钠的物质的量占海藻酸钠中糖单元的物质的量的20～80%；步骤S2所述乙二醇与S1中的高碘酸钠的物质的量相等。

3.根据权利要求1所述基底材料，其特征在于，步骤S5所述氧化的海藻酸钠和海藻酸钠的质量相等。

4.根据权利要求1所述基底材料，其特征在于，步骤S7所述2%氯化钙溶液与无水乙醇的体积相等。

5.根据权利要求2所述基底材料，其特征在于，步骤S8所述COL-I溶液为0.1～0.3% w/v的溶解于冰醋酸的COL-I溶液；步骤S8所述交联为4℃交联24～48h。

6.根据权利要求1所述基底材料，其特征在于，步骤S6所述培养板的每孔中加入0.5～1mL S5所得产物；步骤S8所述培养板的每孔中加入0.5～1 mL COL-I溶液。

7.权利要求1～6任一所述基底材料在制备细胞膜片中的应用，其特征在于，制备细胞膜片的方法包括以下步骤：

（1）将权利要求1～6任一所述基底材料浸泡在细胞培养基中，放入CO₂培养箱孵育1～2h后接种细胞；

（2）接种细胞后，共培养5～14天，然后加入1～2 mL柠檬酸钠溶液，将海藻酸钠水凝胶溶解，即获得细胞膜片。