[发明专利]一种基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法

权利要求书

1.一种基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法，其特征在于：包括如下步骤：

(A)在第一液体培养基中进行农杆菌培养；

(B)进行菌液的离心，收集菌体，采用第二液体培养基重新悬浮菌体；

(C)取洗净的百合鳞片浸没于重悬后的菌体中，取出百合鳞片，将其基部浸入所述第二液体培养基中，进行黑暗培养，即共培养；

(D)取出共培养后的百合鳞片，置于喷雾式植物反应器中，进行百合鳞茎芽诱导，采用喷淋溶液对百合鳞茎进行喷淋处理，获得诱导的小鳞茎；

(E)将诱导的小鳞茎进行移栽，进行转基因植株的筛选。

2.根据权利要求1所述的基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法，其特征在于：步骤(A)中所述第一液体培养基为LB+Rifamycin50mg/L+Km50mg/L，体积为250mL，培养条件为：28℃，200rpm，OD600＝0.6-1.0之间。

3.根据权利要求2所述的基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法，其特征在于：步骤(B)中所述菌液在6000rpm条件下进行离心，收集菌体，用所述第二培养基重新悬浮菌体，至OD600＝0.6-1.0之间，所述第二培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+As0.2mg/L。

4.根据权利要求3所述的基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法，其特征在于：步骤(C)为共培养过程，具体包括如下步骤：

取洗净的百合鳞片浸没于重悬后的菌体中15分钟，取出百合鳞片后将其置于培养容器中，所述培养容器包括培养盘和与其匹配的盘盖，所述培养盘由深色塑料制成，包括盘底和4个培养盘侧壁，均为长方形，所述盘盖由透明塑料制成，包括顶板和4个顶板侧壁，均为长方形，所述培养盘和盘盖的规格均为长18.5cm，宽14.5cm，高4.5cm；4个所述培养盘侧壁和4个所述顶板侧壁均压制成瓦楞型以增加强度；

在所述培养盘内的底部铺设有培养基质，所述培养基质的铺设高度为1.5cm，所述培养基质为陶粒或珍珠岩；在所述培养盘内底部还包括1cm高度的第二液体培养基，所述第二培养基为去除糖和铵盐的1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+As0.2mg/L的溶液；

将所述百合鳞茎的基部向下插入固定在所述培养基质中，并使其基部浸没在所述第二培养基内，盖上所述盘盖，于28℃黑暗培养3-5天。

5.根据权利要求4所述的基于喷雾式植物反应器的百合鳞片遗传转化方法，其特征在于：步骤(D)具体包括如下步骤：取出共培养后的百合鳞片，置于喷雾式植物反应器中，采用

喷淋溶液喷淋处理，进行百合鳞茎芽诱导；

所述喷淋溶液为含有6-BA5.0和NAA1.0的溶液，设置喷雾控制系统，前15天每天喷雾6次，15天之后每天喷雾4次，每次2min，在每次喷淋结束后等待1min，对喷雾式植物反应器底部的残液进行过滤处理后回收，回收时间2min；13-15天鳞片基部会萌发出不定芽，40-50天即可获得诱导的小鳞茎。