[发明专利]UHPLC‑MS/MS同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法

权利要求书

1.一种使用UHPLC-MS/MS同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)混合对照品溶液的配制：

分别精密称取粉防己碱，防己诺林碱，白术内酯I，白术内酯III，毛蕊异黄酮葡萄糖苷，甘草酸，甘草苷，异甘草苷，甘草素，异甘草素对照品适量，加甲醇溶解稀释，摇匀，得到浓度分别为104.16，117.54，23.55，35.63，635.92，2009.56，7920.00，1944.03，135.55，39.01ng·mL^-1的混合对照品溶液；

(2)供试品溶液的配制：

按照防己黄芪汤的处方比例，分别精密称取粉防己12g，黄芪15g，白术9g，炙甘草6g，于煎药锅中，先加420mL的水，浸泡1h，煮沸后，保持微沸状态煎煮30min，以四层纱布滤出药液，药渣再加336mL水煮沸后，保持微沸状态煎煮30min，四层纱布滤出药液，合并两次煎液，加适量水定容到1000mL，精密移取药液2mL置50mL量瓶中，加60％甲醇溶液15mL，超声15min，放冷，用60％甲醇溶液稀释至刻度，12000r/min离心10min，吸取上清液作为供试品溶液；

(3)测定法

色谱条件：采用UHPLC–MS/MS法测定混合对照品及供试品的浓度，应用的色谱条件：色谱柱：C₁₈色谱柱，规格为2.1mm×100mm,粒径为3.5μm；流速：0.4mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：10μL；梯度洗脱条件：流动相为0.1％甲酸水溶液与乙腈的混合物，0～0.8min，乙腈的体积分数从5％线性增加至50％，0.1％甲酸水溶液的体积分数从95％线性减少至50％，0.8～3.0min，乙腈的体积分数线性增加至90％，0.1％甲酸水溶液的体积分数线性减少至10％，3.0～3.1min，乙腈的体积分数线性减少至5％，0.1％甲酸水溶液的体积分数线性增加至95％；

质谱参数条件：

质谱扫描方式为多反应监测模式(MRM)。使用下列参数：离子源温度：500℃；

Q1/Q3(m/z)：623.2/381.3；609.3/367.1；233.1/187.2；249.1/231.0；447.2/285.1；821.3/351.2；417.1/255.1；417.1/255.1；256.2/135.0；256.2/135.0；去簇电压(DP)：39.86；27.13；63.96；54.8；57；-14.67；-17.32；-17.32；-65.84；-65.84V；碰撞能量(CE)：53.9；49.43；22.61；14.42；16.11；-52.15；-23.39；-23.39；-21.65；-21.65V；入口电压(EP)：3.93；4.29；6.81；3.14；6.38；-13.72；-10.15；-10.15；-9.14；-9.14V；碰撞室出口电压(CXP)：10.83；27.3；14；14；14；-22.52；-21.88；-21.88；-17；-17V；雾化气：55psi；辅助加热气：55psi；气帘气：35psi；氮气作为喷雾辅助气体。