[发明专利]UHPLC‑MS/MS同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用UHPLC-MS/MS技术同时测定防己黄芪汤煎剂中10种化学成分含量的方法，属于中药成分分析领域。

背景技术

防己黄芪汤是目前临床常用且疗效显著的中药处方，主要应用于治疗慢性肾炎蛋白尿、类风湿性关节炎、肩周炎等，该方由粉防己、黄芪、白术及炙甘草组成。虽然防己黄芪汤在临床应用方面有显著的疗效，但由于其化学成分复杂，以至于目前关于防己黄芪汤化学成分的研究甚少。防己黄芪汤的主要成分包括生物碱类、黄酮类、内酯类、皂苷类等，传统的检测技术HPLC-DAD由于检测器的局限性，无法同时对防己黄芪汤中多种类别化学结构的多个成分同时进行含量测定。

发明内容

为了解决上述问题，本发明采用UHPLC-MS/MS技术，建立了一种针对防己黄芪汤中10种不同类别化学结构成分同时进行含量测定的方法，这10种成分在结构上涵盖了生物碱类、黄酮类、内酯类和皂苷类，这使得所建立的含量测定方法能够深入和全面地控制防己黄芪汤的质量。

发明采用如下技术方案：

1.防己黄芪汤供试品溶液的制备：

按照防己黄芪汤的处方比例，分别精密称取粉防己12g，黄芪15g，白术9g，炙甘草6g，于煎药锅中，先加420mL的水，浸泡1h，武火煮沸后，文火保持微沸状态煎煮30min，以四层纱布滤出药液，药渣再加336mL水武火煮沸后，文火保持微沸状态煎煮30min，四层纱布滤出药液，合并两次煎液，加适量水定容到1000mL，精密移取药液2mL置50mL量瓶中，加60％甲醇溶液15mL，超声15min，放冷，用60％甲醇溶液稀释至刻度，12000r/min离心10min，吸取上清液作为供试品溶液；

2.混合对照品溶液的配制：分别精密称取粉防己碱，防己诺林碱，白术内酯I，白术内酯III，毛蕊异黄酮葡萄糖苷，甘草酸，甘草苷，异甘草苷，甘草素，异甘草素对照品适量，加甲醇溶解稀释，摇匀，得到浓度分别为104.16，117.54，23.55，35.63，635.92，2009.56，7920.00，1944.03，135.55，39.01ng·mL^-1的混合对照品溶液；

3.测定法：采用UHPLC-MS/MS法分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入分析仪器，测定，即得。

色谱条件：C₁₈Agilent色谱柱(2.1mm×100mm,3.5μm)；流速：0.4mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：10μL；梯度洗脱条件：流动相为0.1％甲酸水溶液与乙腈的混合物，0～0.8min，乙腈的体积分数从5％线性增加至50％，0.1％甲酸水溶液的体积分数从95％线性减少至50％，0.8～3.0min，乙腈的体积分数线性增加至90％，0.1％甲酸水溶液的体积分数线性减少至10％，3.0～3.1min，乙腈的体积分数线性减少至5％，0.1％甲酸水溶液的体积分数线性增加至95％。

质谱参数条件：

质谱扫描方式为多反应监测模式(MRM)。使用下列参数：离子源温度：500℃；Q1/Q3(m/z)：623.2/381.3；609.3/367.1；233.1/187.2；249.1/231.0；447.2/285.1；821.3/351.2；417.1/255.1；417.1/255.1；256.2/135.0；256.2/135.0；去簇电压(DP)：39.86；27.13；63.96；54.8；57；-14.67；-17.32；-17.32；-65.84；-65.84V；碰撞能量(CE)：53.9；49.43；22.61；14.42；16.11；-52.15；-23.39；-23.39；-21.65；-21.65V；入口电压(EP)：3.93；4.29；6.81；3.14；6.38；-13.72；-10.15；-10.15；-9.14；-9.14V；碰撞室出口电压(CXP)：10.83；27.3；14；14；14；-22.52；-21.88；-21.88；-17；-17V；雾化气：55psi；辅助加热气：55psi；气帘气：35psi；氮气作为喷雾辅助气体。

上述步骤3测定法中包括线性关系的测定；精密吸取混合对照品溶液，逐级稀释，得稀释倍数为1，2，4，8，16，32，64的系列浓度溶液。