[发明专利]马铃薯甲虫TOR基因的RNAi表达载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种分离的多核苷酸，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种载体，其特征在于，它含有权利要求1所述的多核苷酸。

3.一种马铃薯甲虫TOR基因的RNAi表达载体，其特征在于：所述RNAi表达载体是以植物表达载体pEarleyGate 303为骨架载体，在重组位点处置换插入顺序连接的EcoR I酶切位点、AsiS I酶切位点、PRBCS3B启动子、NotI酶切位点、SEQ ID NO:1所示的序列、SbfI酶切位点、RBCS3B的第2个内含子、BbvC I酶切位点、SEQ ID NO:1所示序列的反向互补序列、Asc I酶切位点、TRBCS3B终止子、EcoR I酶切位点。

4.一种含有权利要求3所述RNAi表达载体的微生物转化体。

5.一种权利要求3所述的马铃薯甲虫TOR基因的RNAi表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)合成如SEQ ID NO:1和2所示的序列，SEQ ID NO:1所示的序列命名为TOR-RNAi，SEQID NO:2所示的序列命名为RBCS3B-IN2，对pCR8/GW/TOPO载体和RBCS3B-IN2序列进行酶切连接，获得含有RBCS3B-IN2的载体，命名为pRBCS3B-IN2；

(2)将步骤(1)合成的TOR-RNAi序列和载体pRBCS3B-IN2进行酶切连接得到载体pRBCS3B-TORIN2；

(3)将载体pRBCS3B-TORIN2和TOR-RNAi序列进行酶切连接得到载体pRBCS3B-TORRI，pRBCS3B-TORRI中含有如Seq ID No：7所示的序列；

(4)将pRBCS3B-TORRI中插入的Seq ID No：7序列重组到植物表达载体pEarleyGate303上，得到马铃薯甲虫TOR基因的RNAi表达载体。

6.一种权利要求1所述的多核苷酸的用途，用于作为制备特异性干扰马铃薯甲虫基因表达或抑制马铃薯甲虫生长的干扰分子的抑制或沉默靶标。

7.一种权利要求1所述的多核苷酸或权利要求2所述的载体或权利要求3所述的马铃薯甲虫TOR基因的RNAi表达载体在培育抗马铃薯甲虫的转基因植物中的应用。