[发明专利]铜绿假单胞菌的PSR检测方法及其专用引物与试剂盒

权利要求书

1.用于检测铜绿假单胞菌的聚合酶螺旋反应成套引物，其由引物1、引物2、引物3、和引物4组成；

所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别为序列表中的序列2、序列3、序列4和序列5。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为2：2：1：1。

3.用于检测铜绿假单胞菌的聚合酶螺旋反应试剂，包括权利要求1或2所述引物。

4.根据权利要求3所述的聚合酶螺旋反应试剂，其特征在于：所述聚合酶螺旋反应试剂由DNA聚合酶、Tris·HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、Tween20、甜菜碱、Mg²⁺、dNTPs、权利要求1或2所述的引物和水组成；

所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4在所述聚合酶螺旋反应试剂中的浓度分别为40pmol/ul、40pmol/ul、20pmol/ul和20pmol/ul。

5.用于检测铜绿假单胞菌的聚合酶螺旋反应试剂盒，其包括权利要求1或2所述的引物或权利要求3或4所述的聚合酶螺旋反应试剂。

6.如下a)或b)的应用：

a)权利要求1或2所述的引物在制备权利要求5所述试剂盒中的应用；

b)权利要求1或2所述引物，或权利要求3或4所述试剂，或权利要求5所述试剂盒在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有铜绿假单胞菌的产品中的应用；

c)权利要求1或2所述引物，或权利要求3或4所述试剂，或权利要求5所述试剂盒在制备检测或辅助检测待测菌是否为铜绿假单胞菌的产品中的应用。

7.一种检测或辅助检测待测菌是否为铜绿假单胞菌的方法，包括如下步骤：用权利要求1或2所述引物对所述待测菌进行PSR反应，检测PSR反应产物确定待测菌是否为铜绿假单胞菌。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述PSR反应的温度为65℃。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述检测PSR反应产物确定待测菌是否为铜绿假单胞菌的方法为：若能实现扩增，则所述待测菌为或候选为具核梭杆菌；若不能实现扩增，则所述待测菌不为或候选不为具核梭杆菌。

10.根据权利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于：

所述检测PSR反应产物确定待测菌是否为铜绿假单胞菌的方法为1)或2)：

1)、浊度仪检测所述待测菌PSR反应产物浊度变化曲线，若所述待测菌PSR反应产物浊度变化曲线呈上升状态，则所述待测菌为或候选为铜绿假单胞菌，若所述待测菌PSR反应产物浊度变化曲线不呈上升状态，则所述待测菌不为或候选不为铜绿假单胞菌；

2)在所述PSR反应中添加钙黄绿素与氯化锰混合液，检测所述待测菌PSR反应产物的颜色，若所述待测菌PSR反应产物为蓝色，则所述待测菌为或候选为铜绿假单胞菌，若所述待测菌PSR反应产物不为蓝色，则所述待测菌不为或候选不为铜绿假单胞菌；

所述PSR反应的模板具体为待测菌的基因组DNA。