[发明专利]一种石斛药材的检测方法

权利要求书

1.一种石斛药材的检测方法，其特征在于，以夏佛托苷为对照品，采用高效液相色谱法制定标准指纹图谱，测定供试石斛样品的指纹图谱与标准指纹图谱比较，计算相似度，对样品进行评价，具体检测步骤如下：

①对照品溶液的制备：精密称取夏佛托苷，甲醇稀释溶解；

②标准样品溶液的制备：分别取某类不同批次的标准石斛药材干燥样品，粉碎，过筛，精密称取粉末，加入水或一元醇溶解，室温下超声，过滤，滤液浓缩至干，再用甲醇溶解，容量瓶中定容，摇匀，微孔滤膜过滤，即得该类各个批次的标准石斛样品溶液；

③石斛药材HPLC指纹图谱的建立：Alltima C₁₈色谱柱；二极管阵列检测器；流动相为乙腈/乙酸-乙酸铵溶液，梯度洗脱；检测波长为280±10nm；柱温25-35℃；流速0.8-1.2ml/min；在此条件下分析该类各个批次的标准石斛样品溶液，得到该类各个批次标准石斛样品的指纹图谱；

④标准指纹图谱的建立：以对照样品夏佛托苷色谱峰作为指纹图谱的参照峰，计算该类各个批次标准石斛样品各特征峰的相对保留时间和保留峰面积，制定得到该类石斛药材的标准指纹图谱；

⑤供试样品溶液的制备：取供试石斛药材干燥样品，粉碎，过筛，精密称取石斛粉末，加入水或一元醇溶解，室温下超声，过滤，滤液浓缩至干，再用甲醇溶解，容量瓶中定容，摇匀，微孔滤膜过滤，即得供试样品溶液；

⑥石斛药材检测：按照步骤③测定供试样品的指纹图谱，以供试样品指纹图谱中的特征峰的相对保留时间和保留峰面积与标准指纹图谱对比；

其中，流动相A为乙酸-乙酸铵溶液，流动相B为乙腈；

所述洗脱梯度如下所示：

理论板数按夏佛托苷计算，应不低于10000；

所述石斛的标准指纹图谱中含有11个特征峰，保留时间分别为：10.83±0.3min、13.01±0.3min、21.22±0.3min、24.15±0.3min、27.84±0.3min、28.80±0.3min、43.32±0.3min、44.64±0.3min、52.67±0.3min、56.37±0.3min以及66.15±0.3min，其中，保留时间为24.15±0.3min的峰为夏佛托苷对照品的特征峰。

2.根据权利要求1所述的石斛药材的检测方法，其特征在于，标准指纹图谱是由某类若干不同批次的标准石斛药材的指纹图谱通过归一化法制成的。

3.根据权利要求1或2所述的石斛药材的检测方法，其特征在于：步骤①所述的对照品溶液的制备过程为：精密称取夏佛托苷，用75％甲醇水溶液，V水∶V甲醇＝25∶75，溶解稀释，制备成浓度为16.4μg/ml的夏佛托苷溶液即为对照品溶液；步骤①所述的标准样品溶液的制备过程为：取某类不同批次的标准石斛干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末1.000g，置于100ml锥形瓶中，加入50mL 75％甲醇， V水∶V甲醇＝25∶75，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至干，用75％甲醇水溶液溶剂溶解，V水∶V甲醇＝25∶75，然后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得该类不同批次的标准石斛准样品溶液；步骤①所述的供试样品溶液的制备过程为：取供试石斛干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末1.000g，置于100ml锥形瓶中，加入50mL 75％甲醇水溶液，V水∶V甲醇＝25∶75，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至干，用75％甲醇水溶液溶剂溶解，V水∶V甲醇＝25∶75，然后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试样品溶液。

4.根据权利要求1或2所述的石斛药材的检测方法，其特征在于：所述精密称取石斛粉末的称量误差≤0.2％；所述过筛为过孔径0.335mm的筛；所述的一元醇为甲醇或乙醇；所述的室温超声时间为10-40min。

5.根据权利要求1或2所述的石斛药材的检测方法，其特征在于：流动相A为0.4％乙酸+20mmol/L乙酸铵溶液，流动相B为乙腈。

6.根据权利要求1或2所述的石斛药材的检测方法，其特征在于：所述标准石斛药材可以为铁皮石斛、霍山石斛、兜唇石斛、齿瓣石斛、金钗石斛、叠鞘石斛、鼓槌石斛、环草石斛以及流苏石斛中的任意一种。