[发明专利]一种石斛药材的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药领域的药材质量分析，具体涉及一种HPLC(高效液相色谱)指纹图谱法对各类石斛药材的检测方法。

背景技术

石斛是一种常用的滋补中药，主要为石斛属植物。石斛属植物是兰科植物中最大的一个属，包括铁皮石斛、金钗石斛、密花石斛、鼓槌石斛等多个品种。在全球范围内，约有1100多种石斛，其中在我国发现的有76种。石斛的药用价值历史悠久。早在古代，石斛在《神农本草经》中就被列为滋补上品，长久以来，随着时代的发展，石斛一直被人们视为珍贵的中草药，具有十分重要的滋补功效。在临床上，石斛被用于治疗多种疾病，具有增强免疫力、抗氧化、降血糖和抑制癌症等药理功效。由于人为长期无节制采挖及不合理利用石斛，其野生资源日趋减少，市场上出现了一些以假乱真、以次充好的现象。此外，由于石斛产品众多，品质也参差不齐，其品种间的杂交使得其近缘的品种存在性状交叉现象，分类区别比较困难。目前对石斛药材的质量评价局限于对个别或某几类成分的评价，评价结果较片面，不能从整体上进行评价，不能重复，很难推广应用，因此，有必要寻找一种操作方便，高效的测定方法对石斛鲜品、干品的药材质量进行评价。

发明内容

本发明的目的是提供一种石斛药材的检测方法，解决对石斛药材的质量评价主要局限于对个别或某几类成分的质量评价，其评价方式较片面，不能重复，不足以系统、完整的表明石斛药材整体质量的技术问题。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现，具体包括如下步骤：

①对照品溶液的制备：精密称取夏佛托苷，甲醇溶解稀释即可。

②标准样品溶液的制备：取某一类不同批次的标准石斛药材干燥样品，粉碎，过筛，精密称取石斛粉末，加入水或一元醇溶解，室温下超声，过滤，滤液浓缩至干，再用甲醇溶解，容量瓶中定容，摇匀，微孔滤膜过滤，即得该类石斛药材的标准样品溶液；

③石斛药材HPLC指纹图谱的建立：AlltimaC₁₈色谱柱；二极管阵列检测器；流动相为乙腈/乙酸—乙酸铵溶液，梯度洗脱；检测波长为280±10nm；柱温25-35℃；流速0.8-1.2ml/min；在此条件下分析该类标准样品溶液，得到该类石斛药材的指纹图谱；

④标准指纹图谱的建立：以对照样品夏佛托苷色谱峰作为指纹图谱的参照峰，计算该类标准石斛样品各特征峰的相对保留时间和保留峰面积，制定得到该类石斛的标准指纹图谱；

⑤供试样品溶液的制备：取供试石斛药材干燥样品，粉碎，过筛，精密称取石斛粉末，加入水或一元醇溶解，室温下超声，过滤，滤液浓缩至干，再用甲醇溶解，容量瓶中定容，摇匀，微孔滤膜过滤，即得供试样品溶液；

⑥石斛药材检测：按照步骤③测定供试样品的指纹图谱，以供试样品指纹图谱中的特征峰的相对保留时间和保留峰面积与该类标准指纹图谱对比，相似度＞0.85的为该类质量好的石斛药材，相似度＜0.6的为该类石斛药材的劣质品或是其他种类的石斛药材。

进一步地，步骤①中所述的对照样品溶液制备过程为：精密称取夏佛托苷作为对照品，用75％甲醇(V水：V甲醇＝25:75)溶解稀释，制备成浓度为16.4μg/ml夏佛托苷溶液即为对照品溶液；

进一步地，步骤①中所述的标准样品溶液的制备过程为：分别取该类不同批次的标准石斛干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末1.000g，置于100ml锥形瓶中，加入50mL 75％甲醇(V水：V甲醇＝25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至干，用75％甲醇溶剂(V水：V甲醇＝25:75)溶解，然后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得该类不同批次的标准石斛样品溶液；

进一步地，步骤①中所述的供试样品溶液的制备过程为：取供试干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末1.000g，置于100ml锥形瓶中，加入50mL 75％甲醇(V水：V甲醇＝25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至干，用75％甲醇溶剂(V水：V甲醇＝25:75)溶解，然后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试样品溶液；

进一步地，精密称取石斛粉末的称量误差≤0.2％；

进一步地，过筛为过孔径0.335mm的筛；

进一步地，溶解加入的一元醇为甲醇或乙醇；

进一步地，室温超声时间为10-40min；