[发明专利]一种石斛特征指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

①标准样品溶液制备：取石斛干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末，加入75％甲醇，室温下超声30min后取出，过滤，滤液浓缩至干，用75％甲醇溶剂溶解，然后转移至容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得标准样品溶液；

②对照品溶液制备：精密称取夏佛托苷作为对照品，用75％甲醇(V水：V甲醇＝25:75)溶解稀释，制备成浓度为16.4μg/ml夏佛托苷溶液即为对照品溶液；

③标准指纹图谱的测定：分别精密吸取标准样品溶液和对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行测定，以对照品夏佛托苷色谱峰作为指纹图谱的参照峰，计算标准样品各特征峰的相对保留时间和保留峰面积，制定得到石斛的标准指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤①中所述标准样品溶液制备的具体过程为：取石斛干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末1.000g，置于100mL锥形瓶中，加入50mL75％甲醇，室温下超声30min后取出，过滤，滤液减压蒸馏浓缩至干，用75％甲醇溶解，然后转移至5mL容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得标准样品溶液。

3.根据权利要求1或2所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述精密称取石斛粉末的称量误差不能超过0.2％。

4.根据权利要求1或2所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述过筛为过孔径0.335mm的筛。

5.根据权利要求1所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤①中所述的石斛为铁皮石斛、霍山石斛、兜唇石斛、齿瓣石斛、金钗石斛、叠鞘石斛、鼓槌石斛、环草石斛以及流苏石斛中的任意一种。

6.根据权利要求1所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤③中采用高效液相色谱仪进行测定的色谱条件与系统适用性实验为：色谱柱：AlltimaC18色谱柱(250mm×4.6mm，5um)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：20ul；检测波长：280nm，参比波长500nm；流动相：包括流动相A和流动相B，流动相A为0.4％乙酸+20mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，并按一定的洗脱梯度进行洗脱，理论板数按夏佛托苷计算，应不低于10000。

7.根据权利要求6所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述洗脱梯度如下所示：

8.根据权利要求1所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述石斛的标准指纹图谱中含有11个特征峰，其中一个为夏佛托苷对照品的特征峰。

9.根据权利要求8所述的石斛特征指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述石斛的标准指纹图谱中的11个特征峰的保留时间分别为：10.83±0.3min、13.01±0.3min、21.22±0.3min、24.15±0.3min、27.84±0.3min、28.80±0.3min、43.32±0.3min、44.64±0.3min、52.67±0.3min、56.37±0.3min以及66.15±0.3min，其中，保留时间为24.15±0.3min的峰为夏佛托苷对照品的特征峰。