[发明专利]一种石斛特征指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药领域中的一种指纹图谱的建立方法，具体涉及一种石斛特征指纹图谱的建立方法。

背景技术

石斛是一种常用的滋补中药，主要为石斛属植物。石斛属植物是兰科植物中最大的一个属，包括铁皮石斛、金钗石斛、密花石斛、鼓槌石斛等多个品种。在全球范围内，约有1100多种石斛，其中在我国发现的有76种。石斛的药用历史悠久。早在古代，石斛在《神农本草经》中就被列为滋补上品，长久以来，随着时代的发展，石斛一直被人们视为珍贵的中草药，具有十分重要的滋补功效。在临床上，石斛被用于治疗多种疾病，具有增强免疫力、抗氧化、降血糖和抑制癌症等药理功效。由于人为长期无节制采挖及不合理利用石斛，其野生资源日趋减少，市场上出现了一些以假乱真、以次充好的现象。此外，由于石斛品种较多，其品种间的杂交使得其近缘的种存在性状交叉现象，分类区别比较困难。因此，有必要建立石斛的特征指纹图谱对石斛鲜品、干品的药材质量进行评价。

色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别手段，可以判断药材的真伪、评价优劣，可以在整体和局部区分不同品种的药材、同一品种野生和种植、同一品种不同产地的药材、同一品种同一产地不同年份的药材。迄今为止，有关药用石斛HPLC指纹图谱的专利有1项(CN200810218494.5)，成金乐等对石斛中的酚类和黄酮类成分进行了HPLC指纹图谱分析。此方法适合于酚类和黄酮类这两类成分的质量控制。

目前我国对石斛的质量控制主要局限于对个别或某几类成分的质量控制，其评价方式较片面，不足以系统、完整的表明石斛药材的整体质量，急需探索更先进、更有效的质量控制手段。而HPLC特征指纹图谱建立对鉴别与控制石斛药材和含有石斛药材的复方制剂的质量具有重要意义，且建立一种能较全面的质量控制方法来尽量对石斛检测到的化学成分进行质量控制具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种石斛特征指纹图谱的建立方法，通过此建立方法可控制石斛药材的质量。采用特征色谱指纹图谱质量控制方式以分析为手段，从中获取反映药用石斛内在质量的信息，通过对指纹特征的分析比较，评价其内在质量的真实性、一致性和稳定性。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种石斛特征指纹图谱的建立方法，所述方法包括如下步骤：①标准样品溶液制备：取石斛干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末，加入75％甲醇，室温下超声30min后取出，过滤，滤液浓缩至干，用75％甲醇溶剂溶解，然后转移至容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得标准样品溶液；②对照品溶液制备：精密称取夏佛托苷作为对照品，用75％甲醇(V水：V甲醇＝25:75)溶解稀释，制备成浓度为16.4μg/ml夏佛托苷溶液即为对照品溶液；③标准指纹图谱的测定：分别精密吸取标准样品溶液和对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行测定，以对照品夏佛托苷色谱峰作为指纹图谱的参照峰，计算标准样品各特征峰的相对保留时间和保留峰面积，制定得到标准指纹图谱。

进一步地，步骤①中所述标准样品溶液制备的具体过程为：取石斛干燥样品，用粉碎机粉碎，过筛，得石斛粉末，精密称取石斛粉末1.000g，置于100ml锥形瓶中，加入50mL75％甲醇(V水：V甲醇＝25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至干，用75％甲醇溶剂(V水：V甲醇＝25:75)溶解，然后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以0.45μm微孔滤膜过滤，即得标准样品溶液。

进一步地，所述精密称取石斛粉末的称量误差不能超过0.2％。

进一步地，所述过筛为过孔径0.335mm的筛，可以为孔径0.335mm的药典筛。

进一步地，步骤①中所述的石斛为铁皮石斛、霍山石斛、兜唇石斛、齿瓣石斛、金钗石斛、叠鞘石斛、鼓槌石斛、环草石斛、流苏石斛中的任意一种。

进一步地，步骤③中采用高效液相色谱仪进行测定的色谱条件与系统适用性实验为：色谱柱：AlltimaC18色谱柱(250mm×4.6mm，5um)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：20ul；检测波长：280nm，参比波长500nm；流动相：包括流动相A和流动相B，流动相A为0.4％乙酸+20mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，并按一定的洗脱梯度进行洗脱，理论板数按夏佛托苷计算，应不低于10000。