[发明专利]一种牛α-干扰素基因及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201510750781.0 | 申请日： | 2015-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN105349549A | 公开（公告）日： | 2016-02-24 |
| 发明（设计）人： | 张克春 | 申请（专利权）人： | 上海市奶牛研究所 |
| 主分类号： | C12N15/21 | 分类号： | C12N15/21;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C07K14/56;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 200436 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种牛 干扰素 基因 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种牛α-干扰素基因，其特征在于：其序列如SEQIDNO:1所示。
2.一种含如权利要求1所述的牛α-干扰素基因的重组质粒。
3.根据权利要求2所述的一种牛α-干扰素基因的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒为rBoIFN-α-pColdII。
4.一种含如权利要求1所述的牛α-干扰素基因的重组菌株。
5.根据权利要求4所述的一种牛α-干扰素基因的重组菌株，其特征在于：所述重组菌株为rBoIFN-α-pColdII/BL21。
6.一种牛α-干扰素基因的制备方法，包括：
在BoIFN-α成熟蛋白编码基因3’端添加终止密码子TGA，分别在两端设计NdeI/HindIII酶切位点，即得。
7.一种含如权利要求1所述的牛α-干扰素基因的应用，其特征在于：具体步骤如下：
(1)将基因通过NdeI/HindIII双酶切克隆至表达载体pColdII，转化大肠杆菌BL21(DE3)后挑取单菌落进行培养，提取质粒，用NdeI/HindIII双酶切鉴定；
(2)挑取单个阳性重组菌落，置于含有氨苄的LB培养液中振荡培养过夜；将培养菌液按1：250比例接种于上述LB培养液中，37℃振荡培养至OD600＝0.4～0.6，加入IPTG至终浓度为0.01～0.64mmol/L，5～35℃诱导1～21h后，收集菌体沉淀，加入裂解缓冲液，充分悬浮混匀；置冰浴中超声裂解，裂解产物离心，收集上清，沉淀用裂解缓冲液充分悬浮，即得可溶性目的蛋白。
8.根据权利要求7所述的一种牛α-干扰素基因的应用，其特征在于：所述氨苄的浓度为0.1mg/mL。
9.根据权利要求7所述的一种牛α-干扰素基因的应用，其特征在于：所述超声裂解的具体条件为：超声功率400w，工作5s、间隔5s，共计10min。
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