[发明专利]用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的系统和方法

权利要求书

1.一种用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的系统，包括阴离子交换柱、柱状电泳仪和电感耦合等离子体质谱仪，其中使用所述阴离子交换柱的离子交换色谱分离技术与使用所述柱状电泳仪的凝胶电泳采用离线联用，使用柱状电泳仪的凝胶电泳与电感耦合等离子体质谱仪采用在线联用；以及

检测样品经所述阴离子交换柱进行第一维的初步分离，初步分离产物再经所述柱状电泳仪和电感耦合等离子体质谱仪进行第二维的分离和检测。

2.根据权利要求1所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的系统，其中所述阴离子交换柱为HiTrapDEAEFE离子交换柱。

3.根据权利要求1所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的系统，其中所述柱状电泳仪采用内径为2.5mm的柱状凝胶玻璃管，以尼龙套管作为洗脱液引流装置，所述洗脱液过滤后由peek管导出，再经蠕动泵控制流速后引入所述柱状电泳仪和电感耦合等离子体质谱仪。

4.一种用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

采用离子交换色谱分离技术作为第一维分离方法，根据蛋白质等电点不同对检测样品进行初步分离，收集初步分离产物；

以凝胶电泳作为第二维分离方法，通过聚丙烯酰胺凝胶柱对上述初步分离产物进行再次分离；

通过电感耦合等离子体-质谱对上述再次分离产物中的金属离子和非金属离子进行定性与定量检测。

5.根据权利要求4所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的方法，其特征在于，所述离子交换色谱分离技术采用HiTrapDEAEFE离子交换色谱柱。

6.根据权利要求4所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的方法，其特征在于，所述离子交换色谱分离技术中采用的洗脱液为A：pH为7.4的20mMTris-HCl和B：pH为7.4的20mMTris-HCl1.0MNaCl，洗脱程序为0-50％B溶液在30min内进行梯度洗脱。

7.根据权利要求4所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝胶柱为梯度聚丙烯酰胺凝胶分离柱，以Tris-甘氨酸-SDS为电泳缓冲液，在分段电压下进行分离。

8.根据权利要求7所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝胶柱采用玻璃管，内径为2.5mm，长度为13cm，管内自下至上依次填充有8％、10％、13％、15％的分离胶和4％的浓缩胶；所述分段电压下分离的程序为：200V20min，1000V100min。

9.根据权利要求4所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的方法，其特征在于，所述凝胶电泳与电感耦合等离子体质谱联用中使用的洗脱液为50mM的NH₄NO₃溶液，流速为140μL/min。

10.根据权利要求4所述的用于分离和检测金属蛋白和小分子化合物的方法，其特征在于，所述电感耦合等离子体质谱的入射功率为1300W，碰撞气流速为15.0L/min，载气流速为0.8L/min，辅助气流速为0.8L/min，检测质量数m/z为107Ag、127I、201Hg，积分时间为0.1秒。