[发明专利]一种α-L-鼠李糖苷酶在制备羟基脲糖苷衍生物中的应用

权利要求书

1.一种羟基脲糖苷衍生物，名称为：羟基脲鼠李糖苷(1-Hydroxyureal-α-L-rhamnopyranoside)，化学结构式如下：

。

2.一种α-L-鼠李糖苷酶在制备权利要求1所述羟基脲鼠李糖苷中的应用，所述的α-L-鼠李糖苷酶氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。

3.一种酶法制备权利要求1所述羟基脲鼠李糖苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)用磷酸钠缓冲液配制鼠李糖浓度为0.3M～0.5M，羟基脲浓度为0.3M～0.5M，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的α-L-鼠李糖苷酶添加量为5μg～10μg/mL的反应体系；

(2)将步骤(1)制得反应体系于45～60℃水浴中反应24～48小时，煮沸终止反应，离心，取上清液；

(3)将步骤(2)制得的上清液，经分离、干燥后，制得羟基脲鼠李糖苷。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的缓冲液为浓度10～100mM，pH6～8的磷酸钠缓冲液；根据本发明进一步优选的，所述步骤(1)中的缓冲液为50mM，pH6.5的磷酸钠缓冲液。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的离心为10000～12000转/分钟离心30分钟；优选的，所述步骤(2)中的反应条件为55℃水浴反应30小时。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的煮沸终止反应条件为100℃煮沸5分钟。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的分离采用薄层层析进行分离；进一步优选的，所述的分离采用制备型薄层层析板分离。制备型薄层层析板可采用型号如Silicagel60F254的薄层层析板。

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的干燥为冷冻干燥；

优选的，所述步骤(3)中还包括分离时的薄层层析检测，合并迁移距离相同的产物的步骤。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述薄层层析检测的步骤如下：

薄层层析板点样后在展层剂中展开，雾喷显色剂后，于120℃烘烤5分钟使糖斑点显色；

上述展层剂由正丁醇、无水乙醇和水按体积比10：3：2混合配制；显色剂是体积百分比为20％的硫酸和浓度为0.5wt％的3,5-二羟基甲苯的溶液。

10.权利要求1所述羟基尿鼠李糖苷在制备防治肿瘤药物中的应用。