[发明专利]杂交瘤细胞株及其分泌的抗口蹄疫O型(O/GX/09-7)病毒的特异性单克隆抗体与应用有效
申请号: | 201510753950.6 | 申请日: | 2015-11-06 |
公开(公告)号: | CN105296435B | 公开(公告)日: | 2019-03-12 |
发明(设计)人: | 刘国英;郑金来;范秀丽;吴园园;任旭荣;李蓉;张燕红;郝金宝;魏学峰;商晓桂 | 申请(专利权)人: | 金宇保灵生物药品有限公司;北京标驰泽惠生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/20 | 分类号: | C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/535;C12R1/91 |
代理公司: | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人: | 鲁兵 |
地址: | 010030 内蒙古*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 杂交瘤 细胞株 及其 分泌 口蹄疫 gx 09 病毒 特异性 单克隆抗体 应用 | ||
1.以口蹄疫O型O/GX/09-7病毒为免疫原免疫小鼠获得的持续、稳定分泌抗口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,名称为6D6,其保藏编号为CGMCCNo.11196。
2.由权利要求1所述杂交瘤细胞株6D6分泌的特异性单克隆抗体6D6anti,其重链可变区氨基酸残基序列由序列表中SEQ ID No:1表示,轻链可变区氨基酸残基序列由序列表中SEQ ID No:2表示。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体,其特征在于:编码单克隆抗体6D6anti的基因,其重链可变区编码基因的DNA序列由序列表中SEQ ID No:3表示,其轻链可变区编码基因的DNA序列由序列表中SEQ ID No:4表示。
4.一种检测口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的ELISA试剂盒,包括权利要求2或3所述口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的特异性单克隆抗体6D6anti。
5.根据权利要求4所述的ELISA试剂盒,其特征在于,包括:用口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的特异性单克隆抗体6D6anti作为包被抗体包被的微孔板,和用6D6anti作为酶标抗体的酶标记抗体工作液。
6.根据权利要求5所述的ELISA试剂盒,其特征在于,所述用6D6anti作为包被抗体包被的微孔板指的是用10mM pH7.0-7.4PBS将6D6anti稀释成0.5-10μg/mL,加入微孔板中,110μl/孔,置于2-8℃过夜;拍干后,加入含1%BSA的10mM pH7.0-7.4PBS,300μl/孔,置于2-8℃过夜;拍干、干燥后真空装入铝箔袋中备用;
所述酶标抗体为用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记酶标记抗体,然后用酶标记抗体稀释液稀释成工作液,工作液的浓度为0.1-1.0μg/mL;所述酶标记抗体稀释液配方为:Na2HPO4·12H2O,2.9g;NaH2PO4·2H2O,0.296g;NaCl,8.5g;Proclin 300,0.6mL;BSA,10g;胎牛血清,150mL;酶稳定剂,5g;Tween-20 0.25mL;双蒸水,定溶至1000mL;调整pH至7.6-7.8。
7.权利要求5或6所述ELISA试剂盒的使用方法,用于对口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的非诊断性检测,包括以下步骤:
1)用单克隆抗体6D6anti包被微孔板,洗板;
2)封闭经包被的酶联板,洗板;
3)加待测样品,洗板;所述样品为疫苗;
4)加辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记的单克隆抗体6D6anti,洗板;
5)加底物显色;
6)终止反应;
7)测定OD450值。
8.一种检测口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的金标纸层析试纸,由玻璃纤维膜样品垫、结合物释放垫、吸水垫、硝酸纤维素膜组成,硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线,其特征在于:
用浓度为1-5mg/mL的权利要求2所述单克隆抗体6D6anti包被检测线,用浓度为1-5mg/mL的羊抗鼠免疫球蛋白包被质控线;
结合物释放垫上包被有胶体金标记的特异性单克隆抗体6D6anti。
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