[发明专利]杂交瘤细胞株及其分泌的抗口蹄疫O型（O/GX/09-7）病毒的特异性单克隆抗体与应用

权利要求书

1.以口蹄疫O型O/GX/09-7病毒为免疫原免疫小鼠获得的持续、稳定分泌抗口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，名称为6D6，其保藏编号为CGMCCNo.11196。

2.由权利要求1所述杂交瘤细胞株6D6分泌的特异性单克隆抗体6D6anti，其重链可变区氨基酸残基序列由序列表中SEQ ID No：1表示，轻链可变区氨基酸残基序列由序列表中SEQ ID No：2表示。

3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于：编码单克隆抗体6D6anti的基因，其重链可变区编码基因的DNA序列由序列表中SEQ ID No：3表示，其轻链可变区编码基因的DNA序列由序列表中SEQ ID No：4表示。

4.一种检测口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的ELISA试剂盒，包括权利要求2或3所述口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的特异性单克隆抗体6D6anti。

5.根据权利要求4所述的ELISA试剂盒，其特征在于，包括：用口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的特异性单克隆抗体6D6anti作为包被抗体包被的微孔板，和用6D6anti作为酶标抗体的酶标记抗体工作液。

6.根据权利要求5所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述用6D6anti作为包被抗体包被的微孔板指的是用10mM pH7.0-7.4PBS将6D6anti稀释成0.5-10μg/mL，加入微孔板中，110μl/孔，置于2-8℃过夜；拍干后，加入含1％BSA的10mM pH7.0-7.4PBS，300μl/孔，置于2-8℃过夜；拍干、干燥后真空装入铝箔袋中备用；

所述酶标抗体为用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记酶标记抗体，然后用酶标记抗体稀释液稀释成工作液，工作液的浓度为0.1-1.0μg/mL；所述酶标记抗体稀释液配方为：Na₂HPO₄·12H₂O，2.9g；NaH₂PO₄·2H₂O，0.296g；NaCl，8.5g；Proclin 300，0.6mL；BSA，10g；胎牛血清，150mL；酶稳定剂，5g；Tween-20 0.25mL；双蒸水，定溶至1000mL；调整pH至7.6-7.8。

7.权利要求5或6所述ELISA试剂盒的使用方法，用于对口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的非诊断性检测，包括以下步骤：

1)用单克隆抗体6D6anti包被微孔板，洗板；

2)封闭经包被的酶联板，洗板；

3)加待测样品，洗板；所述样品为疫苗；

4)加辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记的单克隆抗体6D6anti，洗板；

5)加底物显色；

6)终止反应；

7)测定OD₄₅₀值。

8.一种检测口蹄疫O型O/GX/09-7病毒的金标纸层析试纸，由玻璃纤维膜样品垫、结合物释放垫、吸水垫、硝酸纤维素膜组成，硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，其特征在于：

用浓度为1-5mg/mL的权利要求2所述单克隆抗体6D6anti包被检测线，用浓度为1-5mg/mL的羊抗鼠免疫球蛋白包被质控线；

结合物释放垫上包被有胶体金标记的特异性单克隆抗体6D6anti。