[发明专利]杂交瘤细胞株及其分泌的抗口蹄疫O型（O/GX/09-7）病毒的特异性单克隆抗体与应用

说明书

本发明公开了能持续、稳定分泌抗口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株6D6，以及由其分泌得到的特异性单克隆抗体6D6anti。6D6anti能够特异性地识别口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒，在ELISA检测中以6D6anti作为包被及酶标抗体可用于检测口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒，并具有高特异性、高灵敏度的优点。本发明将在口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒的检测、疫苗生产、流行病学研究中发挥重要作用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体，特别涉及口蹄疫O型(O/GX/09-7)病毒的特异性单克隆抗体和分泌该抗体的杂交瘤细胞株以及该抗体在检测口蹄疫O型(O/GX/09-7)病毒中的应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth Disease，FMD)属一类传染病，俗名“口疮”、“辟癀”，是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus，FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病，其临床特征为口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱。口蹄疫病毒主要侵害偶蹄兽，偶见于人和其它动物，其主要宿主包括猪、牛、羊等主要家畜和其它家养、野生偶蹄动物等，易感动物多达70多种，最易感染的动物是牛、猪、骆驼、羊、鹿等，野猪、野牛等野生动物也易感染此病。口蹄疫传播途径多、速度快，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。口蹄疫在亚洲、非洲和中东以及南美均有流行，在非流行区也有散发病例。鉴于此，世界动物卫生组织(法语：Office international des épizooties，OIE，也称“国际兽疫局OIE)将其列为A类传染病之首。目前，有三分之二的OIE成员国流行口蹄疫，时刻威胁着无口蹄疫国家和地区的家畜安全和畜产品贸易。

口蹄疫发病后一般不致死，但会使病兽的口、蹄部出现大量水疱，高烧不退，使实际畜产量锐减。另外，有个别口蹄疫病毒的变种可传染给人。因此，每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于口蹄疫传播迅速、难于防治、补救措施少，被称为畜牧业的“头号杀手”。我国对口蹄疫的预防主要通过疫苗注射接种，发生口蹄疫的则捕杀。

口蹄疫病毒(FMDV)是偶蹄类动物高度传染性疾病(口蹄疫)的病原，属于微核糖核酸(小RNA)病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒属(Aphthovirus)，其最大颗粒直径为23纳米，最小颗粒直径为7-8纳米，在病毒的中心为一条单链的正链RNA，由大约8000个碱基组成，是感染和遗传的基础，周围包裹着的蛋白质决定了病毒的抗原性、免疫性和血清学反应能力，病毒外壳为对称的20面体。

目前，口蹄疫病毒在全世界主要有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型，以及65个以上亚型。各型之间几乎没有免疫保护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病，因此常常用多价疫苗来降低患口蹄疫的风险。O型口蹄疫为全世界流行最广的一个血清型，我国流行的口蹄疫主要为O、A、C三型及ZB型(云南保山型)。口蹄疫O型包含多种毒株：O/GX/09-7、O/Mya98/XJ/2010、O/Mya98/BY/2010、O/JMS/2000等。其中，口蹄疫O型(O/GX/09-7)病毒是由中国兽医药品监察所提供，属于Cathay拓扑型新猪毒，该毒株株对乳鼠的适应性较好，毒力较强；在BHK-21细胞上适应性好，遗传稳定；对猪毒力较强；毒株具有较广的抗原谱；1毫升抗原表达量可达3微克以上，每毫升TCID₅₀可达10^7.5以上。

目前，口蹄疫灭活疫苗是预防该病发生的主要有效手段，主要通过将口蹄疫病毒体外培养后、灭活，然后与乳化剂混合制成免疫疫苗。