[发明专利]直唇卷瓣兰组织培养快繁方法

权利要求书

1.一种直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、取直唇卷瓣兰新萌发的嫩芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基包括：花宝1号培养基、0.3-0.7mg/L的甲硫达嗪、1.5-2.5mg/L的萘乙酸、1.5-2.5mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基包括：花宝1号培养基、0.5-1.5mg/L的甲硫达嗪、1.0-2.5mg/L的萘乙酸、0.2-0.5mg/L的激动素、1.5-2.5mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮小苗；其中，所述第三培养基包括：MS、0.1-0.3mg/L的萘乙酸、1.2-1.8mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤四、将步骤三得到的健壮小苗置于第四培养基中培养，得生根试管苗；其中，所述第四培养基包括：1/2MS、80-120g/L的香蕉汁、25-30g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂。

2.如权利要求1所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，其特征在于，在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基中之前，剥去外层包叶，对外植体进行消毒处理，然后剥去茎尖分生组织，所述消毒处理的具体步骤包括：

步骤a、将外植体置入体积分数为1.5-3％的洗洁精水溶液中浸泡3-7min，取出后用线状自来水冲洗15-30min；

步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡8-10min，取出后用无菌水冲洗3-5次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴。

3.如权利要求1所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，其特征在于，在所述步骤四之后，还包括：

步骤五、将步骤四得到的生根试管苗连同培养瓶一起放在自然光照下封盖炼苗7-15天，随后打开培养瓶盖放置3-5天，然后将生根试管苗取出，洗净根部，移栽至椰糠与蛭石质量比为1:1的基质中。

4.如权利要求1所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，其特征在于，

在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天。

5.如权利要求4所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，其特征在于，在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为25-35天、35-45天、25-35天和25-35天。

6.如权利要求4所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，其特征在于，所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为5.5-6.0。

7.如权利要求2所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，其特征在于，在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：

将外植体用海绵包裹，然后将海绵用质量分数为0.06％的GA3溶液润湿，并放入反应釜中，在8MPa、-6℃条件下保持20分钟，随后在5MPa、20℃条件下保持8分钟，最后在1MPa、30℃条件下保持20分钟。