[发明专利]直唇卷瓣兰组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明属于一种组织培养和植物繁殖领域，特别涉及一种直唇卷瓣兰组织培养快繁方法。

背景技术

直唇卷瓣兰(BulbophyllumdelitescensHance)为兰科石豆兰属的一种植物，其根状茎粗壮，匍匐生根，节间被膜质鞘或鞘腐烂后残留的纤维，每间隔3-11cm处生一个假鳞茎。花葶从生有假鳞茎的根状茎节上发出，伞形花序具2-4朵花花瓣镰状披针形，先端截形而凹缺凹口中央具1个短芒，具3条脉，边缘全缘。唇瓣肉质，舌状，向外下弯。其花独特，花期长，极具观赏价值。种子繁殖由于胚发育不完全，自然条件很难萌发。加之人工采挖的压力，生存环境的恶化，野生资源日益减少，直唇卷瓣兰以被列入国家重点保护野生植物。直唇卷瓣兰的组织培养未见相关报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，能够快速有效地提高直唇卷瓣兰种苗的繁殖速度和质量，实现直唇卷瓣兰优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，包括以下步骤：

步骤一、取直唇卷瓣兰新萌发的嫩芽作为外植体，置于第一培养基中培养，得无菌试管苗；其中，所述第一培养基包括：花宝1号培养基、0.3-0.7mg/L的甲硫达嗪、1.5-2.5mg/L的萘乙酸、1.5-2.5mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤二、将步骤一得到的无菌试管苗置于第二培养基中培养，得试管苗丛生芽；其中，所述第二培养基包括：花宝1号培养基、0.5-1.5mg/L的甲硫达嗪、1.0-2.5mg/L的萘乙酸、0.2-0.5mg/L的激动素、1.5-2.5mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤三、将步骤二得到的试管丛生芽置于第三培养基中培养，得健壮小苗；其中，所述第三培养基包括：MS、0.1-0.3mg/L的萘乙酸、1.2-1.8mg/L的6-苄基腺嘌呤、25-35g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂；

步骤四、将步骤三得到的健壮小苗置于第四培养基中培养，得生根试管苗；其中，所述第四培养基包括：1/2MS、80-120g/L的香蕉汁、25-30g/L蔗糖和4.5-5.5g/L的琼脂。

优选的是，所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，在所述步骤一中，将外植体置入第一培养基中之前，剥去外层包叶，对外植体进行消毒处理，然后剥去茎尖分生组织，所述消毒处理的具体步骤包括：

步骤a、将外植体置入体积分数为1.5-3％的洗洁精水溶液中浸泡3-7min，取出后用线状自来水冲洗15-30min；

步骤b、将步骤a得到的外植体置入特制消毒剂中浸泡8-10min，取出后用无菌水冲洗3-5次；其中，所述特制消毒剂为在质量分数为0.1％的升汞溶液中添加吐温-20得到，每100毫升质量分数为0.1％的升汞溶液添加的吐温-20的量为2-3滴。

优选的是，所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，在所述步骤四之后，还包括：

步骤五、将步骤四得到的生根试管苗连同培养瓶一起放在自然光照下封盖炼苗7-15天，随后打开培养瓶盖放置3-5天，然后将生根试管苗取出，洗净根部，移栽至椰糠与蛭石质量比为1:1的基质中。

优选的是，所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，

在第一培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第二培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第三培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天；

在第四培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天。

优选的是，所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，在所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基中的培养时间分别为25-35天、35-45天、25-35天和25-35天。

优选的是，所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，所述第一培养基、所述第二培养基、所述第三培养基和所述第四培养基的初始pH值均为5.5-6.0。

优选的是，所述的直唇卷瓣兰组织培养快繁方法，在所述步骤一中，在对外植体进行消毒处理之前，还包括：