[发明专利]检测左卡尼汀中对映异构体含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种检测左卡尼汀中对映异构体含量的方法。

背景技术

左卡尼汀(Levocarnitine)，又名左旋肉碱，是食物的组成成份，广泛存在于自然界中，山羊肉中含量最高，约为2.1g/kg，而植物性食物中含量极少甚至没有，被认为是类维生素的营养素。人体本身也能合成左旋肉碱，成人体内约有20克左旋肉碱，主要分布于心肌、骨骼肌中。

左卡尼汀于1905年由俄国科学家Gulewitsch和Krimberg从肌肉提取物中首次被发现。经过多年的研究发展，左卡尼汀现已广泛应用于临床。其主要功能是促进脂类代谢，它既能将长链脂肪酸带进线粒体基质，并促进其氧化分解，为细胞提供能量，又能将线粒体内产生的短链脂酰基输出。补充左卡尼汀可缓解其因体内缺乏引起的脂肪代谢紊乱、骨骼肌和心肌等组织的功能障碍。左卡尼汀结构如下：

左卡尼汀结构中存在一个手性中心，所以只存在一个对映异构体，即右卡尼汀。据文献报道，右卡尼汀对肉碱乙酰转移酶和肉碱脂肪酰转移酶有竞争性抑制作用，因此考虑到用药的安全性，需要严格控制左卡尼汀中右卡尼汀的含量。

目前欧洲药典和美国药典中收载的左卡尼汀均未对其对映异构体进行控制，在文献(J.Pharm.Biomed.Anal.30(2002)209-218)、CN101723843A及CN102359995A等文献中，报道了左卡尼汀衍生化之后用HPLC测定异构体的方法，但这些方法所用衍生化试剂成本较高，因此有必要对检测左卡尼汀中对映异构体含量的方法进行更深入地研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测左卡尼汀中对映异构体含量的方法，利用苯甲酰卤化合物作为衍生化试剂，具有较高的重复性、精密度和准确度。

本发明所述的左卡尼汀中对映异构体含量的方法，包括如下步骤：

(1)色谱条件：

色谱柱：CHIRAL IE手性柱，250×4.6mm，粒径5μm；

检测波长232nm；

流动相：正己烷-无水乙醇-三氟乙酸；

流速：1.0～1.5ml/min；

运行时间：25min；

空白溶液：不加左卡尼汀的衍生溶液；

(2)衍生化：

称取左卡尼汀、右卡尼汀，分别置于反应瓶中，加入溶剂和衍生化试剂，60～70℃搅拌0.5小时，减压蒸干，得到相应的衍生物；

(3)对映异构体贮备溶液的配置：

精密称取右卡尼汀衍生物，置于容量瓶中，用无水乙醇溶解，然后用无水乙醇稀释至浓度为0.05mg/ml；

(4)系统适用性溶液的配置：

精密称取左卡尼汀衍生物，置于容量瓶中，再加入对映异构体贮备溶液，用无水乙醇溶解，然后用无水乙醇稀释至左卡尼汀衍生物浓度为1.0～2.0mg/ml、对映异构体衍生物浓度为0.0025～0.005mg/ml；

(5)供试品溶液的配置：

精密称取左卡尼汀衍生物，置于容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至浓度为1.0～2.0mg/ml；

(6)检测方法：

取空白溶液10μl注入液相色谱仪，记录图谱；取系统适用性溶液10μl注入液相色谱仪，重复6次，记录图谱；取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录图谱，记录峰面积，计算左卡尼汀中对映异构体的含量。要求6次测定对映体衍生物峰面积的RSD≤5.0％，主峰峰面积的RSD≤5.0％，各峰保留时间的RSD≤2.0％，各峰间分离度、理论板数均符合要求。

其中：

所述正己烷-无水乙醇-三氟乙酸流动相体积比为70:10～30:0.3。

所述溶剂为甲酸、乙酸或三氟乙酸，优选乙酸，以每克左卡尼汀/右卡尼汀计，溶剂用量为5～10ml。

所述衍生化试剂为具有如下结构的化合物：

X为Cl或Br；R为H、CH₃或CH₃CH₂；R基团的位置为邻位、间位或对位。

所述衍生化试剂优选苯甲酰氯。

所述衍生化试剂的用量为左卡尼汀/右卡尼汀的1.2～2.0当量。

本发明的有益效果如下：

本发明利用苯甲酰卤系列化合物作为衍生化试剂对左卡尼汀进行衍生化，然后采用HPLC进行检测，以面积归一化法计算对映体的含量。本发明检测左卡尼汀中对映异构体含量，有着较高的重复性、精密度和准确度，对控制左卡尼汀原料药的质量、保证用药安全有重要意义。