[发明专利]一种肉制品中氨基吡啶类致癌物的定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种氨基吡啶类致癌物的定量检测方法，特别是涉及肉制品中氨基吡啶类致 癌物的定量检测方法。

背景技术

在癌症的众多诱发因素中，饮食是不容忽视的一项。多项研究表明，长期摄入“过度” 加工的肉制品可显著提高人类患癌的风险，而导致这一现象的主要原因已被证实可能与肉制 品在加工过程中产生的小分子危害物密切相关。

氨基吡啶是一类在高温肉制品中最为常见的杂环芳香烃类致癌和致突变化合物，以2- 氨基-1-甲基-6苯基咪唑并[4，5-b]吡啶为代表，简称为PhIP，此外还包括2-氨基-1，6-二甲基 咪唑并[4，5-b]吡啶，简称为DMIP，2-氨基-1，5，6-三甲基咪唑并[4，5-b]吡啶，简称为TMIP， 以及2-氨基-1-甲基-6-(4′-羟苯基)-咪唑并[4，5-b]吡啶，简称为4′-OH-PhIP等。近年来的研 究表明，氨基吡啶类化合物能显著诱导动物体内多器官患癌，同时还具有极强的致突变性。 国际癌症研究机构于1993年已将包括PhIP在内的8种杂环芳香烃类化合物定义为2B级潜 在致癌物，并将PhIP作为导致人类致癌的因素之一列入了国家毒理学计划中。高温肉制品 中由氨基吡啶类化合物带来的饮食安全问题已引起人们广泛的关注，使得对于该化合物形成 机制和抑制途径的研究成为焦点，而一套快速、准确的检测前处理方法的提出往往是各项进 一步研究的基础。

在复杂的肉制品体系中，氨基吡啶的含量极少，通常以ng/g的水平存在。要想从复杂 的肉基质中提取含量极少的氨基吡啶，选取一种合适的提取试剂，在最大程度保证提取率的 基础上，尽可能的去除干扰UHPLC-MS/MS杂质有很大的技术难度，也给后期的净化提出 了一定的要求。同时，由于氨基吡啶的含量极低，想要采用UHPLC-MS/MS对该化合物进 行精确测定，必须要对该化合物进行富集，并去除基质的干扰，因此在提取后所采用的固相 萃取等富集净化步骤也必不可少。

目前行业上还未有对于氨基吡啶检测的检测标准出现。而对于肉制品中氨基吡啶类化 合物的测定前处理方法已有报道。现行传统检测主要基于液液萃取以及串联固相萃取来完 成，简称液液串联固相萃取法。具体方法是：首先向粉碎后的肉粉末中加入一定量的高浓度 碱溶液后均质，与固定剂硅藻土混合后采用如乙酸乙酯或二氯甲烷的有机试剂将氨基吡啶从 碱液中萃取出来。再将萃取液先后通过PRS和C₁₈两种固相萃取小柱净化，最后用 UHPLC-MS/MS进行测定。但是在应用的过程中发现，该方法对目标化合物的加标回收率低， 所得结果误差过大，且操作繁琐复杂，不利于大规模样本的测定。

发明内容

本发明提供一种肉制品中氨基吡啶类致癌物的定量检测方法，该方法主要是利用 UHPLC-MS/MS定量检测的原理，通过预处理的方法将肉制品中微量的氨基吡啶类致癌物富 集和溶解，使其完全准确的被UHPLC-MS/MS分离和定量，达到定量检测的目的。所述定 量检测方法包括肉制品预处理和UHPLC-MS/MS定量检测两部分，依次包括如下步骤：

制备肉制品的粉末；

加三氯乙酸水溶液并均质处理；

在频率为40±10kHz超声提取15±5min后离心并取上清液；

调节上清液的pH值至3.0±0.5，并通过活化好的MCX小柱；

依次采用盐酸溶液、甲醇溶液淋洗和氨水-甲醇＝1∶9(v/v)混合液洗脱，得到洗脱液；

用氮气吹干洗脱液，加入乙腈复溶，并加入2.5mg/mL的咖啡碱甲醇溶液；

用UHPLC-MS/MS检测，对比标准品与样品图谱中的保留时间，确定样品图谱中对应 的峰，并采用外标法对所得质谱图峰面积进行计算，最终得到肉制品中氨基吡啶类致癌物的 含量。