[发明专利]一种滇一型三系杂交粳稻不育系的分子鉴定方法

权利要求书

1.一种滇一型三系杂交粳稻不育系的分子鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将待鉴别的粳稻材料叶片提取总DNA；

(2)分别设计了两对引物csSPF与csSPR1和RFSPF2与RFSPR21，利用这两对引物，分别进行PCR反应；

所述的引物csSPF与csSPR1序列分别为AACCAACGCCGACCCCAAACA和GGCCGCCCTCCCACCTT；

所述的引物RFSPF2与RFSPR21序列分别为CCTAATTCATGGTTTGTGCACCTGTA和GCCAAGCAATATCCATTGATAAGAGTATTG；

(3)根据两对引物的扩增结果，判定滇一型粳稻不育系，并将之与保持系、恢复系及杂交种区分开。

2.如权利要求1所述的一种滇一型三系杂交粳稻不育系的分子鉴定方法，其特征在于所述的两个PCR反应液的总体积均为15ul，包含2×Taq PCR MasterMix 7.5μL，2个引物 各0.3μL，模板DNA 1μL，ddH₂O 5.9μL。

3.如权利要求1所述的一种滇一型三系杂交粳稻不育系的分子鉴定方法，其特征在于所述的引物对csSPF/csSPR1扩增程序为：

(1)反应液在94℃下预变性5min；

(2)之后反应液分别在94℃变性45s、68.5℃复性45s、72℃延伸30s，并将上述步骤重复28个循环；

(3)最后反应液在72℃温度下延伸7min。

4.如权利要求1所述的一种滇一型三系杂交粳稻不育系的分子鉴定方法，其特征在于所述的引物RFSPF2/RFSPR21扩增程序为：

（1）反应液在94℃ 下预变性5min；

（2）之后反应液分别在94℃变性45s、65℃复性45s、72℃延伸1min，并将上述步骤重复30个循环；

（3）最后反应液在72℃温度下延伸7min。