[发明专利]一种提高甘油酯型鱼油中EPA和DHA含量的方法

说明书

本发明公开了一种提高甘油酯型鱼油中EPA和DHA含量的方法，所述方法为：以米曲霉WZ007经发酵培养获得的湿菌体用pH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮后冷冻干燥制成的冻干菌体为催化剂，以甘油酯型鱼油和乙酯型鱼油为底物，在米曲霉脂肪酶的作用下进行酯酯交换反应合成高含量EPA\DHA甘油酯鱼油；本发明所述中间体的制备方法所用脂肪酶的催化效率高，催化剂可以重复利用，下游分离简单，能耗低，大大降低了生产成本，环境污染小，适合工业化生产。

(一)技术领域

本发明涉及一种提高鱼油中EPA和DHA含量的方法，特别涉及一种以甘油酯型鱼油和乙酯型鱼油为反应底物，在米曲霉脂肪酶的作用下进行酯酯交换反应以提高甘油酯型鱼油中EPA和DHA含量的方法。

(二)背景技术

顺式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(EPA)和顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(DHA)是两种重要的n-3多不饱和脂肪酸(PUFA)，对人体有重要的营养保健功效。天然存在的鱼油中的EPA和DHA含量较低，而且EPA和DHA的甘油酯型易被人体消化吸收，因此制备高含量的EPA和DHA甘油酯鱼油产品成为该领域的研究热点。传统的物理化学法制备高纯度甘油酯EPA/DHA的方法包括低温结晶法，金属盐沉淀法，超临界流体萃取法等。通常理化条件下长链n-3PUFA中的全顺式双键结构易发生顺反异构、氧化、聚合和双键的位移等反应。

生物酶法由于其反应条件温和、步骤简单、环境友好、效率高等优点，成为富集高纯度的甘油酯型EPA/DHA的主要研究方向。目前文献报道的包括水解、醇解、甘油解、酸解、酯酯交换、酯化等路径。这些方法均能在一定程度上提高甘油酯中EPA和DHA的含量，但这些方法的商品化脂肪酶的用量大，生产成本高，因而限制了其工业化生产。国产鳀鱼鱼油EPA\DHA含量为25％左右，要低于进口鱼油EPA\DHA 30％含量，一般鱼油保健品产品EPA\DHA含量为30％(其中EPA含量18％，DHA含量12％)，因此国产鱼油较少用于鱼油保健品的制备，而主要用于饲料工业。

(三)发明内容

本发明目的是为了解决上述方法的不足，通过筛选产脂肪酶微生物，提供了一种廉价高效的脂肪酶，以甘油酯型鱼油和乙酯型鱼油为反应底物，在米曲霉脂肪酶的作用下进行酯酯交换反应合成高含量EPA\DHA甘油酯型鱼油的方法。酶法酯酯交换反应机理(如图1)：鱼油甘油酯中1,3位EPA\DHA含量较低，通过1,3位特异性米曲霉脂肪酶的催化酯酯交换反应可以提高产物甘油酯中的EPA\DHA含量。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种提高甘油酯型鱼油中EPA和DHA含量的方法，所述方法为：以米曲霉(Aspergillus oryzae)WZ007发酵培养获得的湿菌体用pH值为7.0的磷酸缓冲液悬浮后冷冻干燥制成的米曲霉WZ007冻干菌体为催化剂，以甘油酯型鱼油和乙酯型鱼油为底物，在无溶剂体系中30～80℃、200rpm条件下进行反应(优选反应6～24小时)，通过气相色谱仪监控乙酯型鱼油中EPA和DHA总含量的变化，当EPA和DHA总含量稳定不变后，结束反应，将反应液过滤，滤饼回收生物催化剂，滤液分离纯化，获得提高EPA和DHA含量的甘油酯型鱼油；所述底物甘油酯型鱼油中EPA和DHA质量总含量为18％-30％，其中EPA质量含量为9％-21％，DHA质量含量为9％-20％；所述底物乙酯型鱼油中EPA和DHA质量总含量为50％-70％，其中EPA质量含量为30％-40％，DHA质量含量为20％-30％。

进一步，反应体系为无溶剂体系，所述甘油酯型鱼油用量以甘油酯物质的量计，所述乙酯型鱼油用量以乙酯物质的量计，所述甘油酯与乙酯物质的量之比1:2-1:5，优选1:3，催化剂加入量以底物体积(即甘油酯型鱼油和乙酯型鱼油总体积)计为50～200g/L，优选100～150g/L。