[发明专利]人乳头瘤病毒18型单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了人乳头瘤病毒18型（HPV18）特异性的单克隆抗体。本发明提供的特异性单克隆抗体与其它型别HPV无明显交叉反应，用于检测具有高特异性、高敏感性的优点，可以准确检测疫苗种中HPV18型有生物活性疫苗的含量，在临床检测和疫苗生产过程中将会得到广泛应用。

技术领域

本发明涉及分子病毒学和免疫学领域，具体而言，本发明涉及人乳头瘤病毒18型杂交瘤细胞系及其产生的单克隆抗体以及编码它们的序列，和它们进行诊断、预防和治疗的应用。

背景技术

人乳头瘤病毒（HPV）是无包膜的双链小DNA病毒，主要侵及人的上皮组织，进而诱发各种良、恶性增生病变。高危型HPV感染与多种恶性肿瘤的发生相关，低危型的HPV感染则引起肛门和生殖疣。HPV感染的流行范围广，所引发的相关致死性的恶性肿瘤和多种性传播疾病对人类健康具有严重的危害性，开发安全有效的预防或治疗性疫苗具有重大意义。

HPV病毒颗粒直径为55～60nm，核衣壳呈20面体对称，由72个主要衣壳蛋白L1的五聚体及次要衣壳蛋白L2组成。大量研究证实，HPV L1蛋白是HPV疫苗的主要靶蛋白。在多种表达系统中表达的HPV L1蛋白无需L2蛋白辅助即可形成在形态结构与天然病毒颗粒相似的类病毒颗粒(Virus-L1keParticle，VLP)。重组HPV L1-VLP疫苗已经成功上市并用于预防HPV感染及由此导致的宫颈癌、尖锐湿疣等疾病，并充分证明了L1-VLP具有与野生同型病毒相同的抗原性和免疫原性，其结构与天然HPV高度相似，保留了天然病毒的绝大多数中和表位，可诱导高滴度的中和抗体。

国家食品药品监督管理局（CFDA）在《预防用疫苗临床前研究技术指导原则》中指出：“在生产工艺的各个环节和步骤中的产品均应建立相应的监控标准，以便后续工艺的进行，保证产品的质量、工艺的稳定性”，同时要求“在半成品和成品阶段的质量控制至少包括鉴别试验”

在HPV疫苗研发过程中，需要开展四个方面的测定，即型别鉴定实验、抗原含量检测和体外效力测定。其方法均可以采用双抗体夹心法ELISA。因此，在疫苗研究中，单克隆抗体是疫苗抗原质控的重要工具，尤其是具有特异性和中和活性的抗体在疫苗研发中具有不可替代的作用。

目前国外已上市的人乳头瘤病毒疫苗主要有三种，分别是：2006年首次上市的由16、18、6和11型人乳头瘤病毒L1重组蛋白构成的四价疫苗（Gardasil），2007年首次上市的由16和18型乳头瘤病毒L1重组蛋白构成的二价疫苗（Cervarix），以及2014年12月首次上市的由6、11、16、18、31、33、45、52和58型人乳头瘤病毒L1重组蛋白构成的九价疫苗（Gardasil9）。本发明提供了最多可针对九价范围内HPV18的特异性和中和活性的单克隆抗体，利用其中的两株制备的ELISA检测试剂盒，可以特异性地用于快速鉴别并定量HPV18 L1蛋白，可以广泛应用于临床检测和目前疫苗厂家生产疫苗过程中的质检，对女性的健康发展和公共卫生防控将具有重要的意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供能够识别HPV18的单克隆抗体以及产生该抗体的杂交瘤细胞系。

本发明的第二个目的是提供一种用于检测HPV18的双抗体夹心ELISA试剂盒。

本发明的第三个目的在于提供单克隆抗体的制备方法。

本发明的第四个目的在于提供HPV的抗原检测试剂盒的制备方法。

本发明实验目的是通过如下技术方案实现：

本发明提供的单克隆抗体，其是以HPV18 L1五聚体蛋白作为免疫原，制备获得。具体地说是HPV18 L1五聚体蛋白作为免疫原免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合并筛选得到能持续、稳定分泌抗HPV18 L1的杂交瘤细胞株，由各细胞株分泌得到单克隆抗体。