[发明专利]一种金纳米粒子探针比色法检测久效磷残留的方法

权利要求书

1.一种金纳米粒子探针比色法检测久效磷残留的方法，由下述步骤组成：

（1）制备金钠米粒子

将新鲜柑橘成熟果实的外皮烘干后粉碎，过40目筛，浸泡于去离子水中，橘子皮与去离子水质量比为1：10，浸泡1-2小时，再将浸泡液于4000 rpm条件下，离心3分钟，取上清液，此上清液作为浸泡液母液；采用去离子水将浸泡液母液稀释1倍获得所需工作液，冰箱4℃条件下保存；

室温条件下，将4℃、浓度为1g/ml的氯金酸溶液置于反应皿中，伴随磁力搅拌器温和搅动100-150rpm；2分钟后，迅速将工作液加入氯金酸溶液中，氯金酸溶液与工作液的体积比为3:1-6:1，随即观察颜色的变化，即由黄色变为紫色再变为浅酒红色，当体系颜色出现浅酒红色时，搅拌速度提升到300-350rpm，10 分钟后结束反应，获得金纳米粒子溶液，金纳米粒子溶液颜色为浅酒红色，置于冰箱4℃保存备用；

（2）测定金钠米粒子的紫外吸收光谱

吸取步骤（1）所制备的金纳米粒子溶液，加入到比色皿中，再加入去离子水，金纳米粒子溶液与蒸馏水体积比为1:2，混合均匀后，置于紫外-可见光分光光度计中测定吸光度，测得结果金纳米粒子吸收峰在520-550nm；

（3）比色探针法检测久效磷残留

底物的预处理：

首先选择碘化硫代乙酰胆碱作为反应底物，采用去离子水配置10 mM的ATChI溶液100mL，向5ml 的ATChI溶液中加入18 mg硝酸银粉末，充分振荡10秒钟，竖直静置1分钟后离心去沉淀，取上清液，再向上清液中加入1 mg 氯化钠，充分振荡10秒钟，竖直静置1分钟后离心去沉淀，取上清液，此时上清液为含有ATCh⁺的溶液；

金纳米粒子比色法的建立：

分别向离心管中加入无菌水，久效磷工作液和乙酰胆碱酯酶缓冲液后等待10 分钟，再加入ATCh⁺溶液，等待10分钟后，加入金纳米粒子溶液，记录颜色变化，伴随着久效磷浓度的提高，颜色逐渐由浅酒红色转变至紫色再变为深蓝色。

2.根据权利要求1所述的一种金纳米粒子探针比色法检测久效磷残留的方法，其特征在于：用无菌水配制的久效磷工作液浓度为0.01mg/mL；用浓度为0.1mol/L的磷酸缓冲液配制浓度为2 U/mL的乙酰胆碱酯酶缓冲液；0.1mol/L磷酸缓冲液的配制：100mL的磷酸缓冲液需0.1mol/L K₂HPO₄水溶液80.2mL和0.1mol/L KH₂PO₄的水溶液19.8mL。

3.根据权利要求1所述的一种金纳米粒子探针比色法检测久效磷残留的方法，其特征在于：金纳米粒子比色法的建立：无菌水、久效磷工作液、乙酰胆碱酯酶缓冲液、ATCh⁺溶液、金纳米粒子溶液的体积比为5：10：1：1：4。

4.根据权利要求1所述的一种金纳米粒子探针比色法检测久效磷残留的方法，其特征在于：制备后金纳米粒子在6天内具备稳定性，能够正常使用。

5.根据权利要求1所述的一种金纳米粒子探针比色法检测久效磷残留的方法，其特征在于：金纳米粒子探针比色法检测久效磷最低浓度为0.00005 mg/mL。