[发明专利]一种丹红注射液的指纹图谱测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种丹红注射液的质量控制方法，具体涉及一种丹红注射液的指纹图谱测定方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

丹红注射液系由丹参、红花等中药配伍，经加工提取而制成的复方针剂。丹红注射液具有活血化瘀、通络止痛的作用，临床常用于心脑血管系统疾病，药效研究表明丹红注射液具有明显的抗心肌缺血作用，可增加冠脉流量降低心肌耗氧量，有明显的脑缺血保护作用，从抗血小板聚集、抗凝血、改善内皮功能等多方面发挥抗血栓作用等，在呼吸、消化等其他系统疾病中作为辅助治疗药物,疗效显著。然而中药注射剂由于受临床前研究局限，在临床中随着中药注射剂的不断开发和广泛应用，其不良反应的报告也日益增多，因此不断提高其质量控制水平是保证产品质量均一、稳定的必要手段。

中药指纹图谱采用各种先进的分析手段（光谱、波谱、色谱等技术）标示中药组分群体的特性。是实现鉴别中药真实性、评价质量一致性和产品稳定性的可行模式，具有信息量大、特征性强、整体性和模糊性等特点。指纹图谱包括了对已知成分和未知成分的分析，反映的化学成分信息（具体表现为相对保留时间和相对峰面积）具有高度特异性和选择性，可较充分地反映出中药复杂混合体系中各种化学成分量分布的整体状况，尤其是在现阶段有效成分绝大多数没有明确的情况下，能够结合各种色谱、光谱、波谱手段，特征性地鉴定中药的真伪与优劣，成为中药自身的“化学条码”。

中国专利201410185466.3提供了一种治疗心脑血管疾病的中药注射液的指纹图谱测定方法，该方法选用中药自身成分做参照，仅能对丹红注射液中的10种成分进行色谱分离和指认，仍然不能全面控制丹红注射液的质量；文献《丹红注射液指纹图谱研究》（2011年第33卷第8期《中成药》杂志），利用高效液相色谱方法对丹红注射液进行了指纹图谱测定，采用原儿茶醛为标准峰，确定了图谱中的26个共有峰，但并未能对这些共有峰进行指认。

发明内容

针对现有技术存在的指纹认证不完整等问题，本发明提供了一种丹红注射液的指纹图谱测定方法，该方法创新性的在复杂的指纹图谱图中定量外加入一个内标峰，使建立的方法准确简便、灵敏度高、重复性好。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一种丹红注射液的指纹图谱测定方法，包括以下步骤：

（1）对照品溶液的制备：分别称取异绿原酸C、迷迭香酸、紫丁香苷、腺苷、5-羟甲基糠醛、香豆酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、西红花苷I、原儿茶酸、原儿茶醛、丹参素钠、咖啡酸对照品，分别加乙腈溶解，分别制成0.1mg/ml的对照品溶液；

（2）内标溶液的制备：称取异绿原酸C，加入乙腈制成浓度为1mg/mL的内标溶液；

（3）供试品溶液制备：量取丹红注射液，加入0.4%甲酸水溶液稀释，摇匀得稀释液，取稀释液加入浓度为1mg/ml的内标溶液，混匀，即得；

（4）利用高效液相色谱-质谱法进行分析测定。

进一步的，所述供试品溶液的优选的制备方法为：量取丹红注射液5ml，置10ml量瓶中，加入5ml0.4%甲酸水溶液稀释至刻度，摇匀得稀释液，取750μl稀释液加入50μl浓度为1mg/mL的异绿原酸C内标溶液，混匀，即得。

进一步的，所述高效液相色谱分离使用AgelaVenusilMPC18色谱柱：250mm×4.6mm，3μL，在柱温30℃，流速1.0mL/min；检测波长280nm；进样量10μL条件下，以乙腈为流动相A，体积分数为0.2%甲酸水溶液为流动相B，体积分数为0.5%的甲酸水溶液为流动相C进行梯度洗脱。