[发明专利]一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法

权利要求书

1.一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法，其特征在于，包括以下步骤：

标准曲线的绘制：配置n个成梯度浓度的壳聚糖溶液和1个空白试剂，向n个成梯度浓度的壳聚糖溶液和1个空白试剂中分别加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然后再分别在壳聚糖溶液和空白溶液中加入相同体积的活性红4 溶液，混合均匀后得到稀释后的成浓度梯度的壳聚糖待测溶液，静置后分别检测壳聚糖待测溶液的荧光强度，绘制标准曲线，进一步得线性方程：ΔF =68.78c+2.648（c，μg/mL）

式中ΔF = F₀-F，F₀为空白溶液的荧光强度，F为不同浓度的壳聚糖溶液的荧光强度；样品检测：向用醋酸处理待测样品后的上清液中，加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然后再加入等体积的活性红4溶液，混合均匀后静置，检测荧光强度，由线性方程计算出待测样品中壳聚糖的浓度。

2.根据权利要求1所述的荧光猝灭法，其特征在于，所述静置的时间为120分钟以内。

3.根据权利要求1所述的荧光猝灭法，其特征在于，所述活性红4溶液的浓度为1.00×10^-4mol/L，B-R缓冲溶液的pH为4.5。

4.根据权利要求1所述的荧光猝灭法，其特征在于，用醋酸处理待测样品的步骤如下：将待测样品用0.5mol/L的醋酸溶液溶解，待完全溶解后离心，得上清液，上清液稀释后用于荧光猝灭检测。

5.一种定量分析壳聚糖的荧光猝灭法，其特征在于，包括以下步骤：

标准曲线的绘制：配置0.5，1，2，3，5，10，20µg/mL的壳聚糖溶液和1个空白试剂，分别取1mL上述不同浓度的壳聚糖溶液和空白试剂，分别加入2mL的pH为4.5的B-R缓冲溶液，再分别加入1mL的1.00×10^-4mol/L活性红4溶液，用水分别定容至10mL，混合均匀后得到浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、2.0µg/mL的壳聚糖待测溶液，静置15～120分钟，检测壳聚糖待测溶液的荧光强度，绘制标准曲线，进一步得线性方程：ΔF =68.78c+2.648（c，μg/mL）

式中ΔF = F₀-F，F₀为空白溶液的荧光强度，F为不同浓度的壳聚糖溶液的荧光强度；

样品检测：将0.4g待测样品用0.5mol/L的醋酸溶液溶解，定容至100mL，待完全溶解后离心，取2.5mL上清液，并定容至100mL，作为样品操作液，取1mL样品操作液，加入2mL的pH为4.5的B-R缓冲溶液，再加入1mL的1.00×10^-4mol/L活性红4溶液，用水定容至10mL，混合均匀后静置15～120分钟，检测荧光强度，由线性方程计算出待测样品中壳聚糖的浓度。